实验八-九 水细菌总数与大肠菌群数的测定.ppt

实验八-九 水中细菌总数与大肠菌群数 的测定及计数 目的要求 1、学习检测水中细菌总数和大肠菌群数的方法 2、掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法 3、学习使用大肠菌群检索表 实验原理 我国饮用水卫生标准：每ml水样细菌总数37℃培养24h不得大于100个。 水中细菌总数说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物质含量越大； 采用平板菌落计数法测定水中细菌总数。 采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，能使大多数细菌生长。 总大肠菌群指数高，表示水被粪便污染。 采用多管发酵法：初发酵、平板分离和复发酵。 我国饮用水卫生标准：每升水中总大肠菌群37℃培养48h小于3个。 发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基,并倒置一杜氏发酵小管.乳糖能起选择作用,因为很多细菌不能发酵乳糖,而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。为便于观察细菌产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂,细菌产酸后,培养基即由原来的紫色变为黄色。溴甲酚紫还有抑制其他细菌如芽孢菌生长的作用。 产气情况可通过倒置小管中的气泡来观察。 实验材料 1. 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小管），3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小管），伊红美蓝琼脂平板 2. 革兰氏染液，无菌水 3. 灭菌吸管，灭菌试管等 实验方法 1. 稀释水样： 取3支无菌管，分别加入无菌水9ml。取1ml水样加入第一支管中，振荡，混匀，此为10-1。依次做1：10系列稀释至10-2、10-3。 自不同稀释度的试管中各取0.1ml水，分别加入牛肉膏蛋白胨琼脂平板中，用无菌涂布棒在培养基表面将水涂布均匀，室温下静置10min。每一稀释度作2个平板 将平板倒置，37℃，培养24h后，进行菌落计数。 污水中细菌总数的检测 实验方法 4. 菌落计数： CFU/ml 某稀释度的菌落数：两平板菌落数取平均值 选择菌落数在30-300之间的稀释度  例次 不同稀释度的平均菌落数 两个稀释度菌落之比 菌落总数（CFU/ml） 10-1 10-2 10-3 仅有一个稀释度在此范围： 菌落数×稀释倍数 1365 164 20 —— 1.6×104 有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比2，取平均值 2760 295 46 1.6 3.8×104 有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比2，选较小值 3890 271 60 2.2 2.7×104 所有稀释度均300 取稀释倍数最大者 无法计数 1650 513 —— 5.1×105 所有稀释度均30 取稀释倍数最小者 27 11 5 —— 2.7×102 没有任何稀释度在30-300之间 选最接近该范围者 无法计数 305 12 —— 3.1×104 细菌总数实验结果 稀释度 10-1 10-2 10-3 平板 1 2 1 2 1 2 菌落数 平均菌落数 计算方法 细菌总数 实验方法 1. 稀释水样： 取 1ml水样加入9ml无菌水，振荡，混匀，此为10-1。同法稀释至10-2。 2. 初发酵：分别取1ml10-2、10-1的稀释水样和1ml原水样，各注入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨 发酵管中。另取10ml原水样，注入装有5ml 3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中。混匀，37 ℃培养24h，24h未产气继续培养至48h。 普通浓度发酵管中加入20%乳糖0.55ml，3倍浓缩发酵管中加入乳糖0.75ml 多管发酵法测定水中总大肠菌群 实验方法 3.平板分离： （1）制备伊红美蓝平板： 45 ℃，无菌，倾注15ml （2）选产酸产气的发酵管，接种至伊红美蓝平板（分区划线法） （3）培养： 37℃，24h 多管发酵法测定水中总大肠菌群 实验方法 分区划线法 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 实验方法 操作要点 1.划下一个区前必须灭菌接种环 2.划线时接种环同平板呈30-40°角 3.每次划线应该压到上一个区域的2-3条线 4.用接种环的“面”而不是“弧”在平板上滑动 平板分离 （4）菌落特征： 深紫黑色、有金属光泽 紫黑色、无或略有金属光泽 淡紫红色、中心颜色深 （5）革兰染色、镜检：选特征菌