生物化学 第八 遗传信息的贮存和表达.docVIP

第八篇 遗传信息的贮存和表达 （第三十二～四十三章 小结） 第三十二章 DNA复制 DNA复制是以DNA为模板合成相同DNA分子的过程，其主要特征有：需要模板、四种dNTP和Mg2＋；被复制的区域必须进行解链；半保留复制；需要引物，作为引物的主要是短的RNA，少数是蛋白质；复制的方向始终是5′→3′；具有固定的起点；多为双向复制；半不连续性；高度有序、高度进行和高度忠实。 参与DNA复制的主要酶和蛋白质有DNA聚合酶、解链酶、SSB、引发酶、拓扑异构酶、连接酶和端聚酶等。 DNA聚合酶是参与DNA复制的主要酶。大肠杆菌细胞中有DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ。大肠杆菌的DNA聚合酶Ⅰ也称为Kornberg酶，是一种多功能酶，具有5′→3′的聚合酶活性、5′→3′和3′→5′的外切核酸酶活性。使用特殊的蛋白酶处理聚合酶Ⅰ得到的大片段称为Klenow酶，具有3′→5′外切酶和5′→3′聚合酶活性，Klenow酶的手指-拇指-掌心三维结构模式出现在许多具聚合酶上。聚合酶Ⅱ也具有3′→5′外切酶活性，但无5′→3′外切酶活性，参与DNA的修复。聚合酶Ⅲ由多个亚基组成，虽然也具有5′→3′聚合酶活性和3′→5′外切酶活性，但却分属不同的亚基。该酶是参与大肠杆菌染色体DNA复制的主要酶。完整的聚合酶Ⅲ由核心酶、滑动钳和钳载复合物组成。在DNA复制过程中，滑动钳松散地夹住DNA模板，并能自由地向前滑动，大大提高了酶的进行性。DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ属于易错的DNA聚合酶，参与DNA的修复合成。真核细胞中至少有15种以上的DNA聚合酶，除了5种发现较早的聚合酶α、β、γ、δ和ε以外，还发现了聚合酶θ、ζ、η、κ、ι、μ、λ、ψ和ξ等。这些新发现的聚合酶主要参与DNA的跨越合成。γ、δ、ε和θ具有3′-???? 外切酶活性。 DNA解链酶是一类催化DNA双螺旋解链的酶，它除了能够结合DNA以外，还能够结合NTP并同时具有依赖于DNA的NTP酶活性。SSB是一种专门与DNA单链区域结合的蛋白质，无任何酶的活性。 DNA拓扑异构酶是一类通过催化DNA链的断裂、旋转和重新连接而直接改变DNA拓扑学性质的酶。拓扑异构酶被分Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型在作用过程中，只能切开DNA的一条链，而Ⅱ型在作用过程中同时交错切开DNA的两条链。参与DNA复制的是Ⅱ型。所有拓扑异构酶的作用都是通过两次转酯反应来完成的。 DNA引发酶是一种特殊的RNA聚合酶，用来合成RNA引物。 原核细胞内切除RNA的酶是DNA聚合酶Ⅰ或核糖核酸酶H。真核细胞内负责切除RNA引物的酶核糖核酸酶HⅠ/FEN1或FEN1/Dna2。 DNA连接酶是一类催化一个双螺旋DNA内相邻核苷酸3′-???? 羟基和5′-???? 磷酸甚至两个双螺旋DNA两端的3′-???? 羟基和5′-???? 磷酸发生连接反应形成3′，5′-???? 磷酸二酯键的酶。DNA连接酶在催化连接反应时需消耗能量。有的连接酶使用 NAD+，有的使用ATP。 尿嘧啶DNA糖苷酶是一种专门用来切除出现在DNA链上非正常U的水解酶。 端聚酶由蛋白质和RNA组成，其中RNA部分序列充当模板，蛋白质具有反转录酶的活性，它所起的作用是复制端粒DNA，维持染色体端粒结构的完整。 所有的DNA复制都可以分为起始、延伸、终止和分离三个阶段。复制是以复制子为单位进行的。任何一个复制子都含有一个复制起始区。不同基因组DNA具有不同的复制子结构，像细菌染色体、质粒、噬菌体、病毒和线粒体基因组DNA都只有一个复制子，而真核细胞内的每一个染色体DNA都含有多个复制子。 大肠杆菌染色体DNA的复制为θ复制，起始阶段最重要的事件是对其复制起始区oriC 的识别，直到形成引发体。在此阶段涉及DnaA、DnaC、DnaT、DnaB、PriA、PriB、PriC和DnaG蛋白，它们按照一定的次序在oriC 结合或解离，相互间具有招募作用。复制的延伸首先是复制体的形成，这需要聚合酶Ⅲ全酶加入到引发体。一个双向复制的复制子有两个复制体。在每一个复制体上，同时进行前导链和后随链的合成。在一个复制叉内的聚合酶Ⅲ全酶同时催化前导链和后随链的合成，这是因为后随链的模板在复制中形成突环结构。复制结束于终止区，需要Tus蛋白的帮助。最后的两个子代DNA分子的分离需要拓扑异构酶Ⅳ。 某些噬菌体DNA和一些小的质粒在宿主细胞内以滚环复制方式扩增DNA，此外，真核细胞染色体DNA的局部扩增也可以通过这种方式进行；线粒体DNA、叶绿体DNA和少数病毒以D-环的方式进行复制。 真核细胞的细胞核DNA复制与原核细胞的染色体DNA复制不完全相同。参与细胞核DNA正常复制的聚合酶是α、δ和ε。前导链和后随链的合成都经历了从DNA聚合酶α/引发酶复合物到PCNA/DNA聚合酶δ的转换；FEN-1/RNaseH