2014年分子生物学预习作业精选.docVIP

分子生物学预习作业 学号 班级 姓名 一、本学期分子实验的主要内容是： 质粒的碱裂解法提取 PCR扩增质粒中的基因片段 琼脂糖电泳 胶回收DNA片段 酶连 感受态的制作以及转化 二、实验流程及时间安排： （一）实验流程（一般2人一组）： 实验准备——质粒提取——PCR扩增目的片段——琼脂糖电泳鉴定——割取目的片段——胶回收琼脂糖中的目的片段——酶切——琼脂糖电泳——割胶回收酶切过的片段——连接反应——感受态的制作——转化——观察实验结果。 （二）时间安排： 第一天（全天，周五）：质粒的提取；PCR扩增目的片段；琼脂糖电泳并割胶 第二天（全天，周六）：胶回收目的片段；酶切；割胶回收；连接反应（过夜） 第三天（全天，周日）：感受态细胞的制作以及重组质粒转化入DH5α 第四天：看转化结果，整理实验室。 有双学位的同学必须参加第一天（周五）实验，之后的实验请跟老师预约。 三、主要实验操作： 质粒的碱裂解法提取： 1、将含有pEGFP-N1以及UXT基因的两种质粒的大肠杆菌DH5α10μl分别接种到10ml含卡纳霉素(终浓度100μg /ml)的LB培养液中，37℃振摇过夜。 2、取1.5ml菌液转入Eppendorf管中，12000rpm离心1分钟，除去