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实验二 生物样品的荧光观察 实验目的: 1.了解荧光显微镜成像系统的结构、原理；掌握荧光显微镜的应用； 2.掌握生物材料的荧光观察方法。 实验原理（见实验指导） 荧光镜的原理；使用三种染料的原理 ZEISS LSM 510 META 荧光显微镜的工作原理 实验内容 （一）荧光标记观察烟草花粉管内微丝骨架的分布 1、实验步骤： 1） 烟草新鲜花粉萌发 萌发母液（10X）：0.1g KNO3, 0.2g MgSO4.7H2o,0.1g 硼酸和0.3g Ca(NO3).4H2o溶于 100ml蒸馏水中，冷藏。 萌发 室温，摇床130rpm.一小时； 2）固定：取200ul萌发液放入离心管中， 静置沉降，3000rpm离心30秒，吸出培养基，加入200ul 3.6%多聚甲醛（50 mmol/L Pipes配制）固定20分钟。再吸出固定液，用 Pipes缓冲液清洗三次，每次5分钟。 3）染色:3000rpm离心1分钟，吸净缓冲液，加入100nm Alexa Fluo 488 phalloidin 50ul，37度染色20分钟，洗去染液，加入50ul缓冲液，吸取10ul直接进行封片。 4）荧光显微镜观察 激发光波长:蓝光激发； 检测的发射光波长:510-530nm； （二）DAPI染色检测细胞核DNA 1、DAPI 染色液的配置： 2、 实验步骤：用镊子夹住拟南芥的花，将花粉粘在载玻片上，加入20ul DAPI染色液染液，3-5分钟后，临时封片后在荧光显微镜下观。 3.激发光：紫外光,发射光461nm. （三）苯胺蓝染色：观察胞间连丝 实验步骤： 取材：撕取蚕豆叶片表皮，放在载玻片上，加入20ul 0.1% 苯胺蓝染色3-5分钟，紫外激发光下镜检 作业: 1.实验报告 2.作业： （1）结合本实验和使用显微镜实践，总结生物样品的荧光激发类型 （2）使用显微镜期间要注意什么
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