碱性磷酸酶的分离提取.pptVIP

Page ? * 碱性磷酸酶的提取鉴定 朱** 金** 王** 何* 碱性磷酸酶 广泛存在于微生物界和动物界。碱性磷酸酶能催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，产生无机磷酸和相应的醇、酚或糖。它也可以催化磷酸基团的转移反应，磷酸基团从磷酸酯转移到醇、酚或糖等磷酸受体上。 * 如何获取碱性磷酸酶 碱性磷酸酶（AKP）溶于30%乙醇或33%丙酮。但在60%的乙醇或50%丙酮中则形成沉淀。通过离心可以使AKP和其他蛋白分离，从而得到纯化。反复进行纯化的操作，可以获得较高纯度的AKP。 *   1.综合运用有机溶剂沉淀、离心、分光等方法，从组织中分离纯化及鉴定特定蛋白质的技能。 2.掌握碱性磷酸酶制备的操作技术及鉴定的方法 实验目的 *   实验原理 碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二 钠，使之水解生成酚和磷酸盐。酚在碱性溶 液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾 氧化形成红色醌类衍生物，其颜色深浅与 AKP活性成正比。 * 碱性磷酸酶的提取 称取兔肝2g,剪碎后置于玻璃匀浆器中，加入0.01 mol/L的醋酸镁及醋酸钠混合液4ml, 进行匀浆。将其转入离心管，并加2ml 0.01 mol/L的醋酸镁及醋酸钠混合液清洗匀浆器，之后将之倒入离心管，与原来的匀浆液混合。记录体积a，取0.1ml作为A液于EP管，待