酶的主要提取方及其优缺点.docVIP

酶的主要提取方法及其优缺点 生物工程09-1班 杨桠楠09011111125 1、有机溶剂沉淀是利用酶与其他杂质在有机溶剂中的溶解度不同，通过添加一定量的某种有机溶剂，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离的。 优点：1）分辨率比盐析法高2） 沉淀不需脱盐3）溶剂易蒸发，沉淀易离心 缺点：1）有机溶剂易燃、易爆，对安全要求较高。2）对某些具有生物活性的大分子容易引起变性失活，操作需在低温下进行。沉淀析出后要尽快分离，尽量减少有机溶剂对酶活力的影响。 2、等电点沉淀是利用两性电解质在等电点时溶解度最低，以及不同的两性电解质有不同的等电点这一特性，通过调节溶液的pH值，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离的 优点：1）大多数蛋白质的pI都在偏酸性范围内2）无机酸（如磷酸、盐酸、硫酸）价格较低3）无需除掉多余酸即可进行下一步纯化 缺点：1）酸化时，容易引起蛋白质失活 3、有机聚合物沉淀法(复合沉淀法)是在酶液中加入某些物质，使它与酶形成复合物而沉淀下来，从而使酶与杂质分离的。 优点：1）操作条件温和，不易引起生物大分子变性。2）沉淀效能高，使用少量的PEG即可沉淀相当多的生物大分子。3）沉淀后有机聚合物容易去除。 4、盐析沉淀法利用不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同的特性，通过在酶液中添加一定浓度的中性盐，使酶或杂质从溶液中析出沉淀，从而使酶与杂质分离 常用的盐析剂: 硫酸铵 优