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选修三：现代生物科技 专题1、基因工程 高考考纲: 基因工程的诞生（要求：Ⅰ） 基因工程的原理及技术（要求：Ⅱ） 基因工程的应用（要求：Ⅱ） 蛋白质工程（要求：Ⅰ） 一、 基因工程的诞生 （1）什么是基因工程？（课本P1） （2）基因工程诞生的理论基础和技术支持有哪些？【①理论基础：DNA 是遗传物质；DNA 双螺旋结构和中 心法则的确立；遗传密码的破译。②技术支持：基因转移载体的发现；工具酶的发现；DNA合成和测序技 术的发明；DNA 体外重组的实现；重组 DNA 表达实验的成功；第一例转基因动物问世；PCR技术的发明】 二、基因工程的原理及技术 (一)基因工程操作中用到了那些操作工具？【限制酶、DNA 连接酶和载体】 考点细化： 1、【“分子手术刀”——限制酶】 限制酶主要从什么生物中分离纯化出来？【原核生物 】这种酶在原核生物中的作用是什么？【能够识 别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二 酯键断开】 限制酶的特性是什么？【识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，在特定位点切割，产生特定 粘性末端】限制酶产生的末端有几种？ 【经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式：黏性末端 和平末端】 2、【“分子缝合针”——DNA 连接酶】 ①DNA 连接酶类型？【有两类：来自大肠杆菌，称为E.coliDNA连接酶，连接黏性末端；来自T4噬菌体， 称为T4DNA连接酶，既可连接黏性末端又可连接平末端】 ②DNA 连接酶作用部位？【恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键】 DNA 连接酶与 DNA 聚合酶的异同？ 【相同：作用部位都是磷酸二酯键。不同：DNA 连接酶连接 2 个 DNA 片段；DNA 聚合酶是把单个 脱氧核苷酸加到已存在的单链 DNA 片段上】 3、【“分子运输车”——载体】 ①作为基因工程的载体应该具备什么条件？【①能在受体细胞中复制并稳定保存；②具有一至多个限制酶 切割位点，供外源 DNA 片段插入；③具有标记基因，供重组 DNA 的鉴定和选择】 ②常见的载体种类有哪些？【质粒、 λ噬菌体的衍生物、动植物病毒】（二）基因工程的操作步骤包括哪些？【目的基因的获取、基因表达载体的构建、 将目的基因导入受体细胞（转化）和目的基因的检测与鉴定】 考点细化： 1、目的基因的获取 ①目的基因的获取有哪些方法？ 【①从基因文库直接获取；②用人工的方法合成；③利用PCR技术扩增目的基因】 ②基因文库、基因组文库、cDNA 文库有什么区别和联系？【基因文库包括基因组文库和cDNA文库； 基因组文库含有一种生物的全部基因，而cDNA文库指含有一种生物的部分基因，具体区别见课本P10。） 2、基因表达载体的构建（基因工程的核心） ①基因重组操作中构建基因表达载体的目的是什么 ？【使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传 给下一代，并使目的基因能够表达和发挥作用】 ②一个完整的基因表达载体包括哪些组分？【目的基因+标记基因+启动子+终止子】 各部分的作用是什么？【启动子：位于基因首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA; 终止子：是一段有特殊结构的DNA片段，使转录停止； 标记基因：是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来】 ③在构建基因表达载体时为什么目的基因的获取和载体的切割必须用同一种限制酶？ 【为了获得相同的粘性末端】 3、将目的基因导入受体细胞 ① 将目的基因导入植物细胞、动物细胞和 微生物细胞的常用方法各自是什么？ 【导入植物细胞最常用农杆菌转化法，其他还有基因枪法和花粉管通道法；导入动物细胞常用显微注射技术； 导入微生物细胞常用 Ca＋处理法】 ②作为基因工程的受体细胞植物可以采用体细胞，而动物不可以？动物基因工程受体一般采用什么细胞？ 【植物细胞细胞具有全能性，动物细胞中受精卵具有全能性】 ③当受体细胞是大肠杆菌时常用 Ca2+ 处理细胞，这样做的目的是什么？ 【使大肠杆菌成为感受态细胞，吸收外源 DNA 分子】 4、目的基因的检测与鉴定 ①目的基因的检测要从哪些方面进行检测？ 【DNA 分子杂交技术检测是否插入了目的基因 ，核酸分子杂交技术检测是否转录出 mRNA；抗原—抗体 杂交技术检测目的基因是否翻译成蛋白质；个体生物学水平的鉴定如抗虫或抗病的鉴定等】 ②基因工程中的各个操作步骤中哪些步骤需要碱基互补配对？哪些步骤不需要？ 【获得目的基因、构建基因表达载体、和目的基因的检测和表达三个过程存在碱基互补配对，将目的基因导 入受体细胞（转化）过程不存在碱基互补配对】 三、 基因工程的应用 （1）举例说明基因工程在农业生产、医学中有哪些应用？ 【植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用