家兔关节软骨细胞分离与培养.docVIP

家兔关节软骨细胞的分离与培养 实验动物 3周龄新西兰大白兔 实验试剂 胎牛血清, 胰蛋白酶, II型胶原酶, 台盼蓝, DMEM培养基, 甲苯胺蓝染色剂 主要试剂配制方法 1.0.01mol/L PH7.2一7.4PBS NaCI 8.0克 KCI 0.2克 KH2PO3 0.2克 Na2HPO3·12H2O 2.08克 精确称量上述药品并充分溶解于1000mL三蒸水中，用1mol/L HCI和1mol/L NaOH溶液调整pH值至7.2一7.4。 2.DMEM培养液 将DMEM干粉一包溶于1O00mL三蒸水中，按说明书加入NaHCO3，并加入双抗(终浓度为:青霉素100U/mL，链霉素100U/mL)和维生素C(终浓度为:50mg/L)，调节PH到7.0一7.2，超净工作台内过滤除菌。置一200C冰箱保存备用。如需含血清的培养基，于使用前加入足量56℃水浴灭活30分钟的胎牛血清(FCS)。 .1.3主要实验仪器 倒置显微镜, 数码照相机, 二氧化碳培养箱(2300型),超净工作台(SW-CJ一IF型), 低温离心机(Megafuge1.oR型),电子天平(MAllo型) 磁力搅拌器 .2方法 .2.1兔关节软骨细胞的培养与传代 将一只健康的三周龄新西兰大白兔耳缘静脉空气栓塞处死，备皮，用碘