菌种传代和保育要点.docVIP

广州晟和医疗科技有限公司 标准操作规程 菌种传代和保育 SH-JSGC-06-008 起草： （叶玉虹/质检员） 审核： （吴锦添/质管经理） 批准： （王明和/管理者代表） 前三次修改历史： No. 页次 修改后版本 修改日期 主要修改内容 DCRNo. 1 目的 规范试验用菌的管理制度，保证菌种正常保存和传代。 2 范围 广州晟和医疗科技有限公司质量管理部使用的菌种。 3 责任 QC主管、质检员。 4 相关文件或表单 检定菌购买、传代使用记录(SHBD0665) 菌种检查记录(SHBD0666) 灭活记录(SHBD0667) 5 定义 菌种保藏管：内含特制的小珠多颗和特殊溶液，只需将培养好的菌株接入溶液中，摇匀成菌悬液，菌体即吸附于小珠上，然后吸出溶液，将菌种置于相应的温度进行保存小管。未开封使用的菌种保藏管在包装标签上的有效期之前可保存于10-25℃,避光保存。 6 菌种的管理 6.1 菌种的购买和接收 购买的原始菌种管就是玻璃安瓿装的冻干菌，接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料，包括菌种名称、编号等。接收菌种时应检查安瓿的完整性。在相应的菌种接收记录上记上关于菌种的所有信息，如名称、数量和接收日期等。在菌种安瓿及菌种管上粘贴标签，标明菌种名称、编号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、效期。 6.2菌种的编号 将菌种接种至一新鲜培养基上，每萌发一次即称为一代，因此，当原始菌种复温并转至新培养基内生长，即认为已传代一次。从菌种保藏中心获得的冻干菌菌种为第0代，冻干菌菌种开启转种后为第1代。每次接种传代，每支保存菌种需标明菌名、统一编号、传代次数、接种日期、有效期。购进菌种若购进时有编号，延用原编号，于原编号前加菌种名称前两位汉字；若无，用购进日期代替（例：2012年 4月9日购进无编号的大肠杆菌菌种，自编号为:大肠120409）。 传代编号包括原菌种号－传数-管号-珠号，如下： 6.3 菌种保藏分四个阶段：①挑选特征典型的纯菌菌落；②确定保藏的合适菌体形态，孢子和芽胞代谢作用较弱，同时对恶劣环境有很强的抵抗力，因此对凡是能产生孢子或芽胞的微生物都用孢子和芽胞进行保藏；③选择最适宜的保藏法进行保藏；④定期对保藏菌种进行检查，观察是否发生变化，若有变化，需改变保藏方法，保藏期满应及时进行移种。 6.4真空冷冻干燥菌种的恢复培养 安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿瓶，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或镊子敲下已破裂的安瓿瓶顶端。用无菌吸管吸取0.3－0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿瓶内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，接种于1－2支建议的斜面培养基上，并在建议的温度下培养。菌种活化前，请将安瓿瓶保存在6－10℃的环境下。 6.5菌种的确认试验 在菌种购买后传第一代前进行菌种的确认，包括目测菌落生长情况、染色镜检（如图1）和生化试验，其中，生物试验可选取1～2个项目进行试验。假如在该平板上发现有其他菌落生长，则说明或操作有污染或菌种不纯。将此被污染了的培养物灭菌处理。可寻找原因重新分离挑选纯菌落转接斜面菌种作为下一代。见附表A：试验用菌种的确认试验。 图1 革兰氏染色图示 6.6 菌种的保藏 对需要保存的菌株进行必要的纯化，挑取生长旺盛时期的菌落，接入菌种保藏管中，通常需要接入4-7环。拧上盖子，小心地来回颠倒试管使菌尽可能地吸附到菌子上。用无菌吸管将溶液吸走，尽可能吸干，再盖上试管帽，贴上标签（如下），马上放入冰箱中，温度越低越有利于保存。 图2 菌种保存图示 图3 菌种标签图例 6.7菌种的复苏 将菌种保藏管从冰柜中取出。不要让小管内融化。若一次取出多支小管可以使用冰袋、保温箱等以防止融化现象，在无菌条件下，打开小管用无菌针或无菌镊子取出一颗小珠，将小珠放在适合该菌生长的平板上滚动或直接置于肉汤中培养，最后，将小珠以污染材料的推荐处理方式安全地丢弃。 图4 菌种复苏图示 注意事项： 1、使用前如果发现保藏液有浑浊的情况，应该停止使用。 2、菌种操作应该在无菌条件下进行，防止杂菌的污染。 3、多数反复冻融是可以的，但对于一些苛养菌和厌氧菌这样做有可能会影响保存的效果。 7 菌种日常管理 7.1菌种应置于带锁冰箱中，专人管理。 7.2每周检