植物组织DNA提取和鉴定.docVIP

拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定 实验目的 通过实验学习并掌握用CTAB来提取DNA的方法。 了解CTAB的成分及作用。 学习PCR的原理并掌握其方法。 学习琼脂糖凝胶电泳的原理与方法。 实验原理 植物组织中绝大部分是核DNA，它和组蛋白、非组蛋白结合在一起，以核蛋白（即染色质或染色体）的形式存在于细胞核内。CTAB 十六烷基三甲基溴化铵，简称CTAB ：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中 0.7mol/L NaCl 是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度 0.3mol/L NaCl 时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。DNA是遗传信息的载体和基本遗传物质，它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用，是分子生物学和基因工程研究的对象，但无论是研究植物DNA的结构和功能，还是开展外源DNA的转化、转导的研究，首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量的纯化DNA。 T-DNA，转移DNA（transferred DNA ），是根瘤农杆菌Ti质粒中的一段DNA序列,可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物基因组。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，获得转基因植株