实验七植物染色体标本的制备与观察讲稿.pptVIP

实验七 植物染色体标本的制备与观察 一、实验目的 1.学习植物染色体制片的基本原理和方法。 2.了解细胞周期过程中染色体的动态变化。 二、实验原理 常规压片染色体常不能完全散开,容易重叠、变形、断裂，影响显带结果，核型分析较困难。 20世纪70年代以来，参照动物染色体标本制备技术，对植物细胞去壁、低渗、火焰干燥方法，取得了很好的结果。但操作繁琐，费用较贵。 分散良好的标本片用于染色体计数、组型分析、显带、显微操作、原位杂交等分子细胞遗传学研究领域。 染色体组在细胞分裂中期的表型称为染色体组型或称核型，包括染色体数目、形态、大小、着丝点位置及副缢痕及随体的有无等特征。 染色体组型分析就是通过对染色体标本或其照片进行测量、对比分析、配对、分组、排列，对组内各染色体的形态进行测量、描述，从而阐明生物染色体组成的过程。 四、实验方法 一） 根尖培养和预处理 取材：将小麦放在25℃温箱中发芽，待根长到1~2cm左右，窃取0.5cm长的根尖部分。 前处理：剪下根尖用0.1％秋水仙素溶液处理3～4h。也可将剪下的根尖放在0～3℃蒸馏水中，置冰箱中24小时，使分裂的细胞尽可能集中于分裂中期。 固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy固定2～24小时。换入70%的酒精，使细胞的分裂活动处于停滞状态。 制片：有多种方法——切片、压片、滴片等。 解离：取出根尖放入1mol/L HCl（58-60 ℃解离对比）解离14-15min，软化去除细胞壁及果胶物质，使细胞易于分散。 染色：倒去热HCl后，用改良苯酚品红染色液染色5～10min。 漂洗：吸去染色液，用漂洗液换洗2-3次，每次1-2分钟。 酶解：在载玻片上切取根尖着色深的部分，浸入小酒杯内1-2第混合酶液中，室温下酶解40min左右或在28 ℃温箱中酶解20min左右。 洗涤：吸去酶液，加蒸馏水，用吸管换洗几次，吸去残留的煤业后加入45%的醋酸。 压片：用吸管从醋酸中吸去材料，置于干净的载玻片上，保留少许醋酸，盖上盖玻片，覆以吸水纸，轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 镜检 五、实验报告 实验目的 实验用品 实验原理 实验方法 思考题 六、思考题 简述前处理过程中加入秋水仙素的的作用，以及酸解的时间和温度对染色体标本制片质量的影响。 绘制1张分裂有丝分裂中期细胞染色体图像，简要说明其染色体特征。 核型的研究对人类医学遗传研究及临床应用，对探讨动植物起源、物种间亲缘关系，鉴定远缘杂种等方面都有重大意义。 三、实验材料 器具：恒温培养箱，显微镜 试剂：0.1％秋水仙素溶液，Carnoy固定液，1mol/L HCL, 亚硫酸水溶液（漂洗液），纤维素酶，果胶酶，改良苯酚品红染色液（Carbor fuchsin，） 材料：常用分生区组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。本次试验选用：小麦根尖。 1．分裂细胞观察 四：实验观察结果 低倍镜找分裂细胞区,高倍镜观察染色体形态。估计染色体数目。 2．分裂时期及染色体形态观察 尽量寻找下列分裂期染色体图像。 前 期 中 期 后 期 末 期 洋葱根尖细胞染色体 百合根尖细胞染色体 绿豆根尖细胞染色体 3. 典型染色体标本进行显微照相 核型的研究对人类医学遗传研究及临床应用，对探讨动植物起源、物种间亲缘关系，鉴定远缘杂种等方面都有重大意义。 * *