瓜类作物单倍体育种研究进展重点.doc

瓜类作物单倍体育种研究进展 李建欣 庞淑敏 方贯娜 （郑州市蔬菜研究所 郑州 450015） 摘要：综述了瓜类作物单倍体育种的研究进展，包括花药培养、未授粉子房培养和辐射花粉诱导单倍体培养在瓜类作物育种中的应用；总结了近年来所采用的瓜类作物染色体倍性鉴定方法和加倍技术；讨论了目前这些领域存在的问题和今后研究的方向。 关键词：瓜类；单倍体；诱导；育种 Research advances of haploid breeding of cucurbit crops Li Jian-xin,Pang Shu-min,Fang Guan-na (Zhengzhou Vegetable Research Institute,Zhengzhou,450015,China) Abstract: Research advances of haploid breeding of cucurbit crops were reviewed in the paper,including anther culture,ovary culture and induction of haploid obtained by irradiated pollen.Progress of method of ploidy determination and technique of chromosome doubling in cucurbit crops were summarized.Problems and new points to be probed in these areas were proposed. Key Words:cucurbit crop;haploid;induction;breeding 随着植物组织、器官和细胞培养技术的不断深入与发展，单倍体材料以其独特的优势在作物育种中得到了广泛的关注与应用。在瓜类作物中，自发产生单倍体的频率极低[1]，为了获得单倍体，研究者尝试了花药培养、未授粉子房离体培养，辐射花粉诱导的孤雌生殖等手段诱导单倍体。目前据报道南瓜属、葫芦属、西瓜属和苦瓜属等5个属中均已获得了单倍体，有的已开始在育种中加以利用[2]。 1 花药培养 花药培养是以花药为外植体，在单核期诱导小孢子分裂形成胚状体或胚性愈伤组织，然后诱导芽并进一步产生单倍体植株。Dryanovska和Ilieva[3]从甜瓜花药培养产生了单倍体植株；在国内，薛光荣和陶正南[4,5]分别报道了成功获得西瓜和甜瓜花粉植株的研究。但由于诱导率低，未能有效用于西瓜和甜瓜的育种中。 总的来讲，瓜类作物通过花药培养诱导单倍体难度较大，只有西瓜的花药培养较为成功。Xue等[6]于1981年利用琼酥西瓜品种，通过培养单核靠边期的花药在国际上首次获得了西瓜单倍体植株，并从其加倍后代中选育出了优良新品种。袁万良等[7]通过研究解决了愈伤组织褐变死亡的问题，将分化阶段愈伤组织的诱导率从0.5％提高到94.4％。魏英[8]在4℃和10℃的低温条件下进行预处理，降低了花药壁愈伤组织的形成，提高了花药愈伤组织的诱导率。 在南瓜花药培养上，直到1998年，Metwally等[9]才成功得到了10棵单倍体植株，并对培养基进行了筛选，发现单核中期和单核晚期的南瓜小孢子接种在MS＋15％的蔗糖＋5 mg·L-1 2,4-D上培养效果较好，每块愈伤组织植株再生频率可达19.2％。 在甜瓜的花药培养上，Dryanovska等[3]曾做过尝试，结果以失败告终。最早报道黄瓜花药培养的是日本的西贞夫，他指出黄瓜花药愈伤组织形成率对生长素的反应是敏锐的，其增殖也远比其他蔬菜迅速，但将其白中微带黄色的愈伤组织移植到分化培养基上仅见畸形茎叶的分化，却最终不能育成成体植株[10]。Lazarte等[11](1982)对黄瓜花药进行培养表明，深绿色的愈伤组织常常分化为胚状体及分生组织，胚状体可进一步发育为幼苗。Ashok等[12](2003)通过花药培养方法获得了单倍体植株，探讨了预处理、生长因子对黄瓜花药培养的影响，认为4℃预处理2d的黄瓜花药愈伤组织诱导率及胚胎诱导率最高。通过对生长因子的研究结果表明，生长素中2,4-D比其它生长素效果更佳，最佳浓度为2.0μM；细胞分裂素BA优于KN、TDZ，且诱导培养基中低浓度的细胞分裂素有利于启动雄核发育；同时ABA可促进子叶型胚的正常生长并发育成完整植株，对细胞胚性的保持具有较好的作用。此外黄瓜花药可以通过直接胚状体和愈伤组织途径获得单倍体植株[12]，且花药培养受基因型的影响。Kunmar等[13](2004)对黄瓜花药培养的碳源及氨基酸的研究表明花药诱导培养的最佳碳源为蔗糖，浓度0.25M；混合氨基酸 (谷胱氨酸，甘氨酸，精氨酸，天冬氨酸，半胱氨酸