制药工程基础实验实验专业知识.docVIP

实验一、培养基的配置与微生物的接种培养实验 （一）实验目的：通过实验，使学生了解和掌握培养基的配置、消毒方法和接种与培养技术。了解微生物对营养物质的需求，不同微生物的生长差异。 （二）实验原理：微生物必须在含有所需要的营养元素的培养基上才能生长，不同种类的微生物有它所适宜生长的培养基，细菌和真菌的培养基不同，在长期的实践中形成了有些著名的培养基配方和配置方法。微生物的培养过程中要防止其他微生物的存在和生长，因此在接种和培养过程中要进行灭菌和消毒，防止杂菌的干扰。灭菌方式中广泛使用的是蒸汽灭菌，即湿热灭菌。是热灭菌的好处是灭菌效果好，因蛋白质在含水时易变性，另外蒸汽穿透力大，含能量高。使用蒸汽灭菌器要注意排气完全，否则达不到灭菌温度。表1表示排空气程度与实际温度的关系。 表1蒸汽灭菌其中空气排除程度与器内温度的关系 空气排除程度 表压力（kPa） 灭菌器内的实际温度（℃） 完全排除 98.07 121 排除2/3 98.07 115 排除1/3 98.07 112 排除1/3 98.07 109 完全未排除 98.07 100 蒸汽灭菌器的压力有的以1b/in2（磅/英寸2）、kg/cm2表示，现统一以帕（Pa）或千帕（kPa）表示，它们与温度的关系如表4-2。 表2 蒸汽压力与温度的关系 蒸汽压力 相应温度 （℃） kPa Lb/in2 Kg/cm2 34.47 5 0.352 107.7 68.95 10 0.703 115.5 103.42 15 1.055 121.6 137.90 20 1.406 126.6 172.37 25 1.756 130.5 206.84 30 2.109 134.4 表3 糖在不同温度下热灭菌的破坏情况 分析方法 糖名 （10%糖液） 灭菌方法 103.42kPa 121℃ 68.95~82.74kPa 115.6~118℃ 55.16~68.95kPa 113~115.6℃ 100℃ 15min 20min 20min 30min 含量% 破坏 % 含量 % 破坏 % 含量 % 破坏 % 含量% 破坏 % 旋光法 葡萄糖 乳糖 麦芽糖 蔗糖 76.0 67.9 94.0 87.7 24.0 32.1 16.0 12.3 81.8 85.7 84.7 97.7 18.2 14.3 15.3 2.3 99.4 95.3 86.5 98.7 6 4.7 13.5 1.3 92.0 81.9 78.8 96.3 8.0 18.1 21.2 3.7 表4 一些微生物杀死的温度与时间 微生物 热死时间 微生物 热死时间 温度 ℃ 时间 min 温度 ℃ 时间 min 脆弱假单胞菌 氯针假单胞菌 荧光假单胞菌 赛氏杆菌（低温性） 海产弧菌（低温性） 鼠伤寒沙门氏菌 50 60 53 30 25 55 35 10 25 30 80 10* 伤寒沙门氏菌 桑夫顿伯格沙门氏菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 结核杆菌 产气肠细菌 60 63 60 61 47 50 5 6* 7 5~30 30 60 *指活菌数减少一个对数级即90%被杀死所需的时间。 蒸汽灭菌适用范围很广，但主要是培养基的灭菌。在培养基灭菌中最需注意不要过多破坏营养，特别是糖类。糖类在湿热灭菌时破坏情况见表3。 （三）实验材料 大肠杆菌、红豆杉内生真菌。 生化培养箱。 超静工作台 3.接种环或无菌牙签。 4.酒精灯。 5.无菌培养皿。 6.肉汤培养基 牛肉膏 0.5g 水 100ml 蛋白胨 1.0g PH 7.2 NaCl 0.5g 加入1.2％琼脂，即为固体完全培养基（CM）。 7.PDA培养基：PDA）： 马铃薯煮汁 100毫升 蔗糖 2克 琼脂 1.5克 PH值 5.5～6.0 制法：先将新鲜无病害的马铃薯洗净，去皮后切成小薄片，称20克，加水100毫升，煮沸20分钟后过滤，其滤汁为马铃薯煮汁。然后加琼脂和蔗糖煮溶，后补足水分至100毫升，装培养皿灭菌备用。 （四）操作步骤 1按上述要求配置2种培养基，分别装入培养皿； 2放入高压锅中蒸汽灭菌20min。 3待培养基冷却凝固后，在两种培养基上分别接种大肠杆菌和红豆杉内生真菌。37℃培养。 2天后检查生长情况。 （五）实验结果与讨论 1．如何保证灭菌效果？ 2 不同种类的微生物菌落形态有何差异？ 3 如何为微生物选择合适的培养基？ 实验二、微生物的显微镜观察 （一）实验目的：通过实验使学生了解显微镜的结构和使用方法，了解和掌握微生物的染色技术。 （二）实验原理： （三）实验材料 菌种 大肠杆菌，红豆杉内生真菌。 染色液 草酸铵结晶紫染液；蕃红液。 器具 显微镜，香柏油，