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微生物分離技術 目的:1.學習如何在固體培養基上純化微生物並得到單一菌落 2.學會劃碟法、塗碟法、倒碟法的操作技術 原理:微生物經由增殖步驟可將想研究的菌種在選擇性培養基中 大量繁殖,然而可能仍有少數其他菌種從在其中,無法完成 純化,因此有必要進一步利用分離技術,將微生物分離成獨 獨立菌落,達成純種培養? 設備:錐形瓶、玻璃培養皿、接種環、三角彎棒、吸球、定量玻 璃管、取藥杓、酒精燈、螺紋試管、試管蓋、秤藥紙、試 管架、恆溫培養箱 操作過程: 劃碟法 把水樣做10倍稀釋 為了要滅菌所以用酒精燈燒接種環(要等冷卻才可塗抹菌液) 用45度角劃在培養基上，分別在四個不同的地方，但不要重複劃在同個位置 隔天看結果 塗碟法 取原液1ML加入9ML的培養水中稀釋到你要的，使用定量吸管吸取連續3個濃度試管當中的0.1ML，分別滴入1~2滴的菌液在培養皿中。 將酒精中過火滅菌過的三腳彎棒，等冷卻後進行塗抹法，利用旋轉方式均勻的塗在培養皿的四周。 放入恆溫培養箱中，等隔天後再來看結果. 倒碟法 1.先連續稀釋水樣 2.再從滅菌釜中拿出的NA培養基，要趁還未完全變冷時，用 無菌玻璃定量吸管吸取其他稀釋管之菌液一滴分別加入無菌培養皿中央。 3.倒入15~20ML的NA培養基在培養皿中，混合均勻後冷卻凝結。 4.放入恆溫培養箱去培養，隔天觀察紀錄。 實驗結果: 劃碟法(原液下去做的): 菌落數:297個 198個 菌落數:8個 70個 菌落數: 120個 倒碟法: 菌落數:10的負六-150、65個, 10的負七-180、36個 菌落數: 10的負八-無法計算、31個 原水樣菌落數原水樣菌落數 菌落數:10-8有無法計算,206個 10-7有 81,250個 菌落數:10-6 225和186個 原水樣菌落數原水樣菌落數我們討論的結果是可能是稀釋的還是不夠多，因為汙水的菌落數量非常的濃厚，所以歸類在沒有稀釋的夠。 劃碟操作是否有困難或障礙的地方? 有，會不小心把她劃破，因為會緊張手會發抖，然後導致沒有劃好，或是太緊張會忘記要以45度角去劃，但最後就習慣了 心得: 池政奇： 這次的實驗要劃碟，起出用練習的時候就劃的還不是很好了，所以在正式劃碟的時候好緊張喔，怕會不會劃的不好，結果出爐後還真的沒有有劃的很好，真是讓人小小的失望。 吳承祐: 劃碟法應該是我覺得所有實驗中最難的,因為一開始根本不知在 劃神麼、劃到哪了,但練習多劃就會有點頭緒,劃完考試就馬上抽 到劃碟,這樣算幸運的吧. 謝勝德: 這次的實驗是以塗碟、倒碟、劃碟下去做，感覺真的很特別，尤其是劃碟，因為都沒做過所以顯得特別，那個真的要先練習過幾次畫出來才會比較順手和成功，不然會不小心劃破或失敗，其他兩種方法則是以前有做過，所以馬上就很快就好了，這次又學到不一樣的方法真的好不錯呢。 組員貢獻度: 謝勝德100％ 吳承祐100％ 池政奇100％ 環境微生物的檢測訂正 原理: 利用以前所教的塗膜、倒碟的知識來檢測土壤、空氣、汙水的菌落數，用知其所教的原理來判別方式 討論:關於菌數太多,問題應該不是出在滴的量,因為我們只有滴1滴,應該是我們再做稀釋的時候倍數不夠!要以二段水的稀釋容器不小心改成了量筒. 以同地不同時作圖表: 地點:中央草皮 時間:10分,20分 菌落數:14個,6個,7個,13個