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Summer research 研究主題：Yeast One Hybrid system 中央研究院生農所籌備處 楊文欽教授 Institute introduction 作物改良組 中草藥研究組 環保及工業用酵素 動物疫苗技術 Introduction Introduction Th1 cells activate macrophages. Enabling them to destroy intracellular microorganisms more efficiently. Th2 cells drive B cells to differentiate and produce immunoglobulins of all other type. Introduction T細胞由未受刺激的Th0細胞發展到 Th1細胞的分化過程中，其Interferon gamma promoter (pIFN-γ) 會被活化而導致IFN-γ的產生。 T-bet 可以促進 T細胞從 Th0 細胞分化到 Th1 細胞，也可以控制 IFN-γ 的表現。 Introduction Material Yeast Main difference between yeast and E.coli culture Method Yeast One Hybrid system One-Hybrid System provides an in vivo genetic assay used for isolating novel genes encoding proteins that bind to a target, cis-acting regulatory element Protein-DNA interaction 由於 T-bet 可和 IFN-γ啟動子結合並且調控之，因此想利用 T-bet 和 IFN-γ啟動子的作用來探討 Yeast one hybrid 系統是否可以偵測到兩者的作用。若可行，我們將利用此系統進一步來篩選其他能和 IFN-γ啟動子作用的基因，與研究這些基因的產物是否可以促進 T cell 從 Th0 細胞分化到 Th1 細胞。 Future work Screen library to find new transcription factor. * * 生科04級 881714 何國維 Lymphocyte stem cell （Bone marrow） B cell （Bone marrow） T cell（Thymus） Tc （Cytotxic T cell） Th （Helper T cell） Th0 Th1 IFN-γ T-bet 16 hours 4~6 days E.Coli Yeast 37℃ 30℃ E.Coli Yeast LB YPD E.Coli Yeast Incubation time Incubation temperature Culture medium AD AD BD AD BD 報導基因 BD AD BD AD BD AD AD AD BD AD BD Reporter gene BD c. Activation b. Fusion protein binding a. Fusion protein expression AD BD AD BD AD BD AD BD Yeast chromosome Constructed plasmid T-bet IFN-r promoter GAL4AD XbaI IFN-r promoter EcoRI ligation Reporter gene T-bet binding domain EcoRI PstI Activation domain ligation Report gene Yeast strain：YM4271（MATa）、Y187（MATα） Can’t synthesis histidine、 leucine、uracil by itself。 Yeast Incubate Yeast selection medium -His or -Leu or -Ura Yeast can’t growth on selection medium pHISi-IFN-γ Yeast（YM4271） Yeast selection medium -His pGAD424-T-bet Yeast（Y187） Yeast selection medium -Leu Yeast selection me