实验讲义-酶制生产与应用.docVIP

尼龙固定化木瓜蛋白酶 一、目的： 了解共价交联法固定酶的原理和步骤 二、原理 尼龙是聚酰胺物质，经HCl水解后暴露出游离NH2，NH2与戊二醛反应，尼龙即成活化载体，可与酶表面NH2反应，把酶连在尼龙上。 ? 三、实验材料、仪器和试剂 1、材料 尼龙布(86或66)，140目，剪成3cm×3cm 2、仪器 (1)恒温水浴锅 (2)紫外分光光度计 (3)冰箱 3、试剂 (1)18.6%CaCl2溶液 (2)甲醇溶液 (3)3.65mol/LHCl溶液 (4) 0.2mol/L硼酸缓冲液(pH值8.5) (5)5%戊二醛溶液：用0.2mol/L硼酸缓冲液配制，pH值8.5 (6) 0.1mol/L磷酸缓冲液(pH值7.8) (7)1mg/mL木瓜蛋白酶溶液 (8) 0.5mol/L NaCl溶液 (9) 0.1mol/L磷酸缓冲液(pH值7.2) (10)激活剂：用0.1mol/L磷酸缓冲液(pH值7.2)配制，含20mmol/L半胱氨酸、1mmol/LEDTA的混合液。 (11)0.5%酪蛋白溶液：用0.1mol/L磷酸缓冲液(pH值7.2)配制。 (12)10%三氯乙酸(TCA)溶液。 四、操作步骤 1、固定化酶的制备 (1)每组取5块尼龙布洗净、晾干，浸入含18.6%CaCl2溶液1