梅毒螺旋体抗体-TP.docVIP

梅毒螺旋体抗体（Anti-TP）检测 1. 实验原理： 本试剂盒为双抗原夹心ELISA方法，用于检测血清或血浆样本中的，梅毒螺旋抗体，试剂盒中所用包被抗原和酶标记抗原均为精致的基因工程表达的梅毒螺旋体特异性抗原，显色剂为（TMB）。本试剂盒可用于献血员筛选，婚检和临床诊断梅毒螺旋体感染。 2.标本收集和处理： 2.1.抽取患者静脉血3ml于不抗凝或抗凝的带盖的一次性试管内，密闭，尽快送达免疫室。 2.2.待血块收缩后，尽快离心分离血清，抗凝血可立即离心分离血浆，当日不检测的样本（已分离的血清或血浆），置2～8℃冰箱保存；1周内不检测的的标本（已分离的血清或血浆），－20℃冷冻保存。 2.3.避免反复冻融标本。 2.4.其他部门使用过的标本，应予拒收。 3.试剂： 3.1 生产厂家：英科新创（厦门）科技技术有限公司 3.2. 产品批准文号:国药准字 S座机电话号码 3.3.组成: 3.3.1.酶联反应条：12孔×8 3.3.2 酶标试剂：12.0ml×1瓶 3.3.3.阳性对照：0.5ml×1瓶 3.3.4.阴性对照：0.5ml×1瓶 3.3.5.洗涤液（用前以蒸馏水稀释20倍）：50ml×1瓶 3.3.6.显色液A：6.0ml×1瓶 3.3.7.显色液B：6.0ml×1瓶 3.3.8.终止液：6.0 ml×1瓶 3.3.9.封片：2片 3.4.试剂储存条件：2-8℃。 4.仪器： 4.1.洗板机：PW-960（ 产地：中国） 4.2.酶标比色仪：安图2010（ 产地：中国） 5.操作程序： 5.1 配液：将50ml浓缩洗涤液（20×）用蒸馏水或去离子水稀释至1000ml后备用。 5.2 编号：.根据当日样本量准备好检测用反应微孔板条，然后将酶标板条固定于板架上，按顺序编号，每板设阴性、阳性及空白对照各1孔（空白对照不加样品及酶标试剂）。 5.3 加酶：每孔加100ul酶标试剂。 5.4 加样：分别在相应孔中加入待检测样品，或阴、阳对照20ul，振荡混匀。 5.5 温育：用封板膜封板后，置37℃温育60分钟。 5.6 洗涤：小心将封板膜揭掉，使用洗板机吸干孔内液体，用洗涤液充分洗涤6遍，最后一次尽量扣干。 5.7显色：每孔加显色剂A、B各50ul，轻拍混匀，用封板膜封板后置37℃避光显色15分钟。 5.8.肉眼观察结果，并记录在登记本上。 5.9.终止反应：每孔加终止液50ul,混匀。 5.10.样本按编号依次放置于板架上，阴性及阳性则按规定分别放置于G11及G12，空白放置于G3。 5.11.用酶标仪比色读数，取波长450nm，用空白孔校零，读取各孔OD值。 6.结果判定： 6.1 临界值（CUTOFF）计算：临界值 阴性对照孔OD值+0.18。 6.2 阴性对照的正常范围：正常情况下，阴性对照孔OD值≤0.01。 6.3 阳性对照的正常范围：正常情况下，阳性对照孔OD值≥0.80。 6.4 阳性判定：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者为梅毒螺旋体抗体阳性。 6.5 阴性判定：样品OD值 临界值（CUTOFF）者为梅毒螺旋体抗体阴性。 7.操作注意点： 7.1 检测必须符合实验室管理规范和生物安全守则的规定，操作时必须戴手套，穿工作衣，严格执行消毒隔离制度，所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 7.2 梅毒螺旋体抗体检测结果的判定必须以酶标仪读数为准。 7.3 试剂盒从冷藏环境中取出时应置室温平衡15-30分钟方可使用，未用完的微孔条用自封袋密封保存。 7.4 洗涤液可用蒸馏水或去离子水配制，洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净，使用洗板机洗涤时应设定30-60秒的浸泡时间。 7.5 操作应按说明书严格进行，不同批次试剂不得混用，封板膜为一次性用品，不能重复使用。 7.6 终止液为2mol/L的硫酸，使用时必须注意安全。 8.临床意义： 抗TP检测的是梅毒特异性抗体,即使经足量药物抗梅毒治疗,此抗体仍能持续存在,甚至终身。因此此检测主要用于确诊梅毒，对疗效观察意义不大。 9.参考文献： 9.1.试剂盒说明书。 9.2. 《梅毒病学》北京科学技术出版社。 实验室 主 题 文件编号-MY 重庆市妇幼保健院检验科免疫室 梅毒螺旋体抗体（Anti-TP）检测 第 1 页 共 3 页 第 2 版 第3次修改 撰写日期：2012年11月20日 起草者 撰写者 批 准 人 生 效 日 期 熊涛 熊涛 李秋红 2012-11-26