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杨桃遗传多样性的形态特征与RAPD标记的相关性分析 　　摘 要： 【目的】为指导杨桃种质资源的引进以及良种选育提供科学依据，【方法】采用形态标记数量聚类分析和RAPD分子标记相结合，对广东地区10份杨桃品种资源进行遗传多样性分析，并将形态学聚类和RAPD分子标记聚类结果加以对比。【结果】在所观察的12个形态性状中，变异系数为14.08%～49.71%，平均变异系数为25.38%。从100条RAPD随机引物中筛选出10个引物，共扩增出58条带，其中53条为多态性带，多态率达93.02%。聚类分析结果表明，形态标记和RAPD标记都可依果实风味将供试材料分组，即甜味和酸味。2种标记方法的相关系数为r0.01=0.685 3，达到显著水平。【结论】杨桃具有丰富的遗传多样性，2种方法聚类结果相似，且相关性高，具有较高的可靠性。 　　关键词： 杨桃； 形态性状； RAPD； 聚类分析 　　中图分类号：S667.9 文献标志码：A 文章编号：1009-9980？穴2013？雪01-0069-06 　　杨桃（Averrhoa carambola L.）又名五敛子、阳桃、洋桃等，属酢浆草科（Oxalidaceae）杨桃属（Averrhoa Linn.）植物。因其横切面如五角星，故国外又称之为“星梨”[1]。最早从马来西亚及越南传入我国，已有2000多年栽培历史，是久负盛名的岭南佳果之一。杨桃果形美，味甜，具有较高的营养价值。既可鲜食，也可加工成多种加工品。叶、果、花、根都可入药。此外，杨桃生长快，早结丰产，可周年供果，耐旱、耐瘠，适应性强，病虫害少，经济效益好，是著名的岭南佳果之一[2-3]。 　　广东省作为杨桃的主要产区，近年来从台湾、新加坡、马来西亚、泰国等地引进许多新的品种，并通过嫁接方式培育了不少经济价值高的品种。随着引进品种的不断增多，而当地又有不少地方品种，这就造成杨桃品种繁杂和混乱，且出现了不少同名异种或同种异名现象，给果农选种育苗带来较大的困难，也对产量造成很大的影响。 　　目前对于杨桃种质资源遗传多样性的研究报道较少，刘韬等[4]对福建省主要杨桃品种遗传多样性进行了RAPD分子标记分析，将17份杨桃品种划分为3 个类群，并得出杨桃品种资源之间具有丰富的多态性，证明了RAPD标记在杨桃遗传多样性研究中的可行性。传统的遗传多样性和亲缘关系的研究方法除了分子标记还有根据形态特征来进行研究的方法。而分子标记与形态性状的聚类分析结果各有侧重，相互补充[5]。在研究中把分子生物学手段与形态性状比较鉴定结合起来分析可以避免单一方法对研究结果造成偏差[6-7]，而且结合形态标记和分子标记技术来研究植物种质资源遗传多样性和亲缘关系已被证实是可行和可靠的[8-9]，但应用这2种技术对杨桃进行遗传多样性研究至今未有报道。 　　因此，笔者利用RAPD技术和形态标记数量聚类分析方法对广东地区10个主要杨桃品种进行遗传多样性分析，并对其进行综合客观评价，以期为杨桃种质的鉴定、保存、创新以及嫁接栽培选择合适的砧木提供科学依据。同时，通过对广东杨桃品种的遗传多样性进行评估，为当地杨桃资源保护、种质资源的引进、新品种选育以及核心种质构建提供参考和科学依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　材料分别采集于广东地区湛江、茂名、阳江等地种植的台湾、泰国、马来西亚和新加坡等7个引进品种和粤西地区3个本地品种的叶片，具体见表1。 　　1.2 植物学特征的统计与编码赋值 　　杨桃果树叶性状在果树达到生长盛期时调查，在种植地随机选取5株有代表性的植株，每株随机选取10枚叶片观察，数量性状的记录数值为5株的平均值；果实性状的调查在达到商品成熟度时进行；在种植地随机选取生长正常的杨桃5个，数量性状的记录数值为5个果实的平均值。通过对各杨桃品种叶片和果实的形态观察，分别选取12个性状进行数量分类研究，并进行编码赋值。调查的具体性状和编码情况见表2。参照郭先锋等[10]的数量分类学方法对不同品种进行聚类分析，并绘制树状图。 　　1.3 DNA提取方法及检测 　　杨桃总DNA的提取采用改良的2×CTAB法[11]，用紫外分光光度计在260 nm和280 nm下测定OD值，检测DNA的质量和浓度，并稀释到30 mg·L-1。 　　1.4 RAPD标记 　　从100条随机引物中筛选出10条条带清晰、稳定、重复性好、多态性强的引物，并用这10条引物对10份杨桃样品的总DNA进行扩增。 　　RAPD-PCR反应体系为25 μL，其中包括： 10×PCR buffer 2.5 μL，20 mmol·L-1 MgCl2 2.5 μL，2 mol·L-1 dNTP 2.5 μL，8 pmol·L-1随机引物1 μL，2 U Taq酶，30 ng模