水稻根系活力测定.docVIP

一、水稻根系活力测定 ????1. 水稻根系流液的测定????（1） 测定意义 水稻根伤流液的多少与根系活力有密切的关系，在一定时间内测定伤流液的重量，是衡量根系活力的一个较为简便的方法。????（2） 测定方法 选用一端封闭，一端开口的很薄的塑料套管，管内放进少时脱脂棉（在天平上称得重W2），两次重的差数，代表一定时间内（t）的伤流量，并按下式计算：????伤流量（g/小时）=（W1-W2）/t????（3） 注意事项????① 如果没有合适的塑料套管，可以自己制作，直径大小出切口直径稍大一点，使能自由套昆为度。水稻伤流量较少，套管的长度一般2-3cm即可。用塑料薄膜根据所需大小栽成小片，在需要合缝的地方折迭起来上面紧贴上玻璃纸，而后将烧燃的烙铁在纸上前后左右移动，检查套管不漏气即可使用。????② 收集伤流液在一天当中的最适时间随植物种类和环境条件而异，一般最好在上午进行。????③ 套管理与地上部切口套管理接之处，一般不须密封。一则可省去手续上的麻烦，二是水分从套接的地方蒸发的机会微不足道，不影响测定结果。????2. 水稻根系氧化的测定（a-萘胺法）????（1） 测定意义：水稻根系的氧化力除了叶部吸收的氧转入根部外，根部还有一条乙醇酸氧化途径，这条途径可产生过氧化验氢，以后在过氧化酶的作用下产生氧，是水稻根产生氧化力的一条特殊代谢途径，由于水稻根有氧化力，可氧化土壤中有害的还原物质，从而保证了根的正常代谢。据试验报道，当根氧化力增大时，根的有氧呼吸较旺盛，吸收养料也较多。根的a蔡胺氧化力可作为水稻根系活力的一个重要指标。????（2） 原理与方法 a-蔡胺吸附在水稻根表面时，能被根系氧化，生成红色羟基蔡胺，故可从根表面染争的深浅，粗略地估计根的氧化力。定时测定则是对a-蔡胺氧化前后浓度的变化进行测量。一般用对氨基苯磺酸和硝酸作显色剂，使与a-蔡胺起显争反应，生成对一碘酸-a蔡胺偶氮苯。其化学肥应如下：????（3） 试剂配制????① 100μg/ml a蔡胺标准浓液。精确称了取分析纯a-蔡胺1. 0000g，溶于1000ml蒸馏水中。充分溶解后从中吸取100ml稀释至1000ml即成100μg/ml a-蔡胺溶液，保存在棕我瓶中，置于低温黑暗处。使用前稀释至40μg/ml。????② 1%对氨基苯硫酸溶液。称1g对氨基苯磺酸，深于100ml30%的乙醇溶液中。????③ 100ppm亚硝酸钠溶液。称0.1g亚硝酸钠于1L蒸馏水中。????④ 0.1M磷酸盐缓冲液。同0.1M磷酸二氢 钾、0.1M氢氧化钠溶液按6. 32:3. 77的窖混合而成。此缓冲液的ph应为7. 0。????⑤ 标准曲线的绘制：用吸管分别注入40μg/ml a-蔡溶液于6只25ml的容量瓶中，使含量分别为0（空白）、12. 20、30、40、50、60μg。加入等量的磷酸缓冲液，显色。并分别测定各溶液的光密度，绘制曲线。????（4）测定方法 取具有代表性水稻植株若干，尽量避免伤根，洗去根部泥土后，再用蒸馏水淋洗，最后用吸水纸将根部水分吸干。将距根尖2cm长的一段取下，混合均交，称1g重（或沿根的基部将根部切下取混合根1g），置于100ml三角瓶中，加40μg/ml a-蔡胺所引起的。把此时作为零值。为了测定这一浓度值，在根系浸入a-蔡10分钟后，立即从此平衡液中准确地吸取2ml入入25ml容量瓶中，这是第一次取样。紧接着塞好瓶塞，置于振荡器上，于25℃振荡3-6小时。再次从平衡液中准确地吸取2ml，放入另一25ml容量瓶中，这为第二次取样。无论哪一次取样；如溶液混浊，均须过滤。由于a-蔡胺在空气中振荡时会自动氧化，故须作空白试验。????在两次取样的容量瓶中，各加入蒸馏10ml，1%对氨 基苯磺溶液和100μg/ml亚硝酸钠溶液各1ml。充分摇动5分钟，使之显色，然后加蒸馏水定容，摇匀。在20-60分钟内用1cm比色杯于510nm波长或50号滤光片分别测定前后两次样品中a-蔡含量。并求得根的净a-蔡胺氧化值。一般用鲜根1g，振荡3小时，二室温下进行，但须注明温度，以便比较。????（5） 结果计算 以1g鲜根，振荡3小时为例，第一次取样是根上吸附的氧化铁氧化a-萘受浓度（A）。它是酶促反应前a-萘胺的起始浓度。????第二次取样是在根的酶促反应3小时后剩余的a-萘胺浓度（B）。所以（A-B）则是根的氧化量和自动氧化量之和。????空白试验是a-萘胺在振荡3小时的自身氧化量（C）。????溶液是等体积的40μg/mla-萘胺溶液和磷酸缓冲共50ml，所以每毫升a-萘胺含量为20μg/ml。X为稀释倍数。因为取样为2ml，酶促反应是在48ml的a-萘胺溶液中进行的，所以X为24。???? ?