分子生物学课后题答案终结版.docVIP

第7章、基因操作 1.PCR过程中的DNA模板变性、模板与引物退火、引物延伸3步的温度设置一般大致是多少？要考虑的主要因素是什么？ DNA模板变性 (denature)： 95℃左右高温使模板DNA完全变性。 单链DNA模板与引物退火 (annealing)：55℃左右引物与模板形成复合物的几率DNA分子自身的复性。 引物的延伸 (extension)： 72℃左右耐热DNA聚合酶在最适温度下催化DNA合成反应。 2.衡量PCR好坏的参数主要有哪些？一般来说好的结果如何体现？ 特异性Specificity:最好只有目的DNA带。 真实性Fidelity:DNA序列正确。 产量Quantity:DNA带明亮。 3. 以TaqMan技术为例，简述实时荧光PCR的原理。 PCR扩增时，Taq酶的5’- 3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而使荧光监测系统可接收到荧光信号； 每扩增一条DNA链就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。 4. 用于核酸探针标记的32P ATP有几种， DNA切口平移标记法、随机引物标记法和5′末端标记分别应该用哪种？为什么？ 2种：r-32P ATP、a-32P ATP (1) DNA切口平移标记法：[α-32P]-dCTP (2) DNA随机引物标记法：[α-32P]-dCTP (3) DNA的