基因工程(上课用)1.1剖析.pptVIP

专题1 基因工程 操作环境： 体外 技术： 结果： 创造出符合人们需要的新的生物类型和生物产品 水平： 分子水平 原理： 基因重组 DNA重组和转基因等技术 别名： DNA重组技术 对象： DNA分子 基因拼接的基础： 基因表达的基础： 不同DNA分子的化学组成（基本单位）和空间结构相同 生物共用一套密码子 (1)基础理论的重大突破： ①DNA是遗传物质的证明； ②DNA双螺旋结构和中心法则的确立； ③遗传密码的破译。 (2)技术发明使基因工程的实施成为可能： ①基因转移载体和工具酶相继发现； ②DNA合成和测序技术的发明； ③DNA体外重组得到实现，重组DNA表达实验获得成功。 (3)基因工程的发展与完善： ①1980年，科学家首次培育出世界上第一个转基因小鼠。1983年，世界第一例转基因烟草培育成功，基因工程进入迅速发展阶段。 ②1988年PCR技术的发明，使基因工程进一步发展和完善。 1.1 DNA重组技术的基本工具 1.分子手术刀——限制性核酸内切酶（限制酶） （3）作用特点： （1）作用： 识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 （4）作用部位： 主要 来自原核生物 磷酸二酯键 （2）来源： 切割DNA 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 G 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ A 3’,5’-磷酸二酯键 3’端 5’端 3’端 5’端 磷酸二酯键 重播 如:EcoRI限制酶 （5）限制酶的识别序列特点： （6）结果：产生黏性末端或平末端 黏性末端 平末端 思考: 不同的限制酶切割产生的黏性末端一定不同吗？ 思考: 1、限制酶存在于原核生物中的作用是什么？ 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是，生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 2、为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA ？ 因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，对于外源入侵的DNA可以降解掉。生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵 2.分子缝合针——DNA连接酶 （1）连接部位：磷酸二酯键 （2）作用： （3）种类： 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 A A T T G C A A T T A A T T DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶的作用 DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？ 比较项目 DNA连接酶 DNA聚合酶 相同点 作用实质相同，都是催化两个核苷酸之间形成磷酸二酯键 不同点 是否需要模板 不需要 需要 接DNA链 双链 单链 作用过程 在两个DNA片段间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的DNA单链片段上，形成磷酸二酯键 作用结果 将已存在的DNA片段连接 合成新的DNA分子 用途 基因工程 DNA复制 思考：限制酶与DNA(水解）酶的区别？ 3.分子运输车——载体 （1）作用： 将外源基因送入受体细胞 （2）常用的运载体： 质粒、λ噬菌体衍生物和动植物病毒 （3）质粒的特点： 质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物中 是拟核或细胞核外能够自主复制的很小的环状DNA分子.　 （4）运载体必须具备的条件： (1)有一个至多个限制酶切点 ——供外源DNA插入其中。 (2)在细胞中进行自我复制，或整合到染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制 ——便于提供大量目的基因 (3)有标记基因 ——供重组DNA的鉴定和选择 （4）对受体细胞安全无害 （5）