第二章愈伤组织的培养.ppt

第二章 愈伤组织的培养 主要内容 教学目的与要求 1.了解愈伤组织细胞分化的各时期的特点 2.掌握植物激素控制理论 3.掌握愈伤组织的形态发生 4.区别胚状体发生途径与器官发生途径形成植株 5.愈伤组织培养在园艺植物育种中的应用 第一节 愈伤组织的诱导与分化 一、概念 1.愈伤组织培养 将母体植株上的各个部分切下，形成外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。 3.分化 细胞在分裂过程中发生结构和功能上的改变，从而在个体发育中形成各类组织和器官。 4.脱分化 已分化好的细胞在人工诱导条件下，失去特有的结构功能，恢复分生能力的过程。 5.再分化 脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。 二、愈伤组织的诱导 1.概念：愈伤组织的诱导就是使已分化的植物细胞脱离原来的发育轨道，失去原有状态和功能，恢复到未分化的状态的过程。 2.形成愈伤组织的难易程度 （1）双子叶植物比单子叶植物和裸子植物诱导愈伤组织容易； （2）幼年细胞和组织比成年细胞和组织容易； （3）二倍体细胞比单倍体细胞容易。 3.诱导 （1）选取外植体 （2）外植体的处理 （3）培养基诱导 三、愈伤组织细胞的分化 从外植体脱分化形成典型的愈伤组织大致可分为三个时期： 1.诱导期 诱导期是细胞正在准备分裂的时期，是愈伤组织形成的起点。 （1）影响诱导期长短的因素 ①植物种类； ②外植体的生理状况； ③外部因素：光照、二氧化碳。 （2）植物生长调节剂对诱导期的影响 植物生长调节剂对诱导细胞开始分裂效果最好。通常依据实际情况，通过调节植物生长调节剂的种类和浓度来诱导细胞开始分裂。常用的有2,4-D、NAA、IAA和CTK。 （3）诱导期细胞内发生的变化 ①气体交换增加，如氧气的吸收增加； ②RNA含量增加（增加到300%）； ③蛋白质量增加（每个细胞的总增加量为200%）； ④酶活性增强。 2.分裂期 指外植体细胞经诱导脱分化，不断分裂、增生子细胞而形成愈伤组织的过程。 （1）细胞分裂期的主要表现 ①细胞的数目迅速增加； ②每个细胞平均鲜重下降； ③细胞体积小，内无液泡； ④细胞的核和核仁增至最大； ⑤细胞中RNA含量减少，而DNA含量保持不变； ⑥随着细胞不断分裂和生长，细胞的总干重、蛋白质和核酸含量大大增加，新细胞壁的合成极快。 （2）分裂期的愈伤组织的共同特征 细胞分裂快； 结构疏松； 缺少有组织的结构； 颜色浅而透明； 维持其不分化的状态。 （3）优良愈伤组织的特征 ①高度的再分化能力； ②容易散碎； ③旺盛的自我增殖能力； ④经过长期继代保存而不丧失再分化能力。 3.分化期 分化期是指愈伤组织细胞停止分裂，细胞内发生一系列形态和生理上的变化，形成一些不同形态和功能的细胞的时期。 分化期特点如下： （1）细胞分裂部位和方向发生改变； （2）分生组织瘤状结构和维管组织的形成； （3）细胞的体积相对稳定，不再减小。 （4）出现了各种类型的细胞。 （5）生长旺盛的愈伤组织呈乳白色、白色或浅绿色，老化的多转化为黄色或褐色。 第二节 愈伤组织的继代培养 一、培养基和培养条件 1.培养基 （1）无机营养 氮、钾和磷——细胞过度生长，形成层组织减退； 铁——细胞分裂停止。 硼——细胞分裂停滞，细胞伸长。 锰或钼——影响细胞伸长。 （2）植物生长调节物质 一般使用的浓度为0.1～10mg／L。 使用植物生长调节剂时，要注意种类和浓度，特别是生长素和细胞分裂素的比值。 高 利于形成根 生长素/细胞分裂素 适中 产生愈伤组织。 低 利于芽的分化 （3）有机成分 培养基中加入糖、各类B族维生素、和甘氨酸等，可满足愈伤组织生长和分化的要求。 各种氨基酸和嘌呤、嘧啶类物质，可促进器官分化。 酰胺类往往有促进器官形成的作用。 2.培养条件 （1）光照 在愈伤组织培养中，一般采用全暗、周期性光照、散射性光照三种方式。愈伤组织的诱导需弱光或不需光。继代培养一般需光。器官发生阶段，一般周期性光照比较好。 （2）温度 24～28℃ 二、继代培养物的分化潜力 1.生理因素 在组织培养过程中，由于植物材料内部的一些变化，而导致继代培养物分化潜力发生变化。 2.遗传因素 在继代培养中通常出现染色体紊乱。 第三节 愈伤组织的形态发生 一、不定芽和根的发生 1.生长阶段 （1）外植体脱分化形成愈伤组织，这是外植体发生细胞分裂的结果； （2）愈伤组织中形成一些分生细胞，形成瘤状结构，这是细胞分化、分化组织出现和有限细胞分裂的共同结果。 （3）器官原基