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PAGE PAGE 14 分光光度法条件实验及测定微量铁 　 　 一、目的 1、学习如何选择吸光光度分析的实验条件。 2、掌握用吸光光度法测定铁的原理及方法。 3、掌握分光光度计的使用方法。 二、原理 1、? 光度法测定的条件：分光光度法测定物质含量时应注意的条件主要是显色反应的条件和测定吸光度的条件。显色反应的条件有显色剂的用量，介质的酸度、显色时温度、显色时间及干扰物质的消除方法等；测量吸光度的条件包括入射光波长的选择、吸光度范围和参比溶液等。 2、二氮杂菲-亚铁络合物：邻二氮杂菲是测定微量铁的一种较好的试剂。在pH=2～9的条件下Fe2+ 离子与邻二氮杂菲生成稳定的橘红色络合物，此络合物的 lgK稳 =21.3, 摩尔吸光系数ε510=1.1×104 在显色前，首先用盐酸羟胺把 Fe3＋离子还原为 Fe2＋ 离子，其反应式如下： 2 Fe3＋+2NH2OH·HCl→2 Fe2＋+N2+2H2O+4H++2Cl- 测定时，控制溶液酸度在pH=5左右较为适宜。酸度过高，反应进行较慢；酸度太低，则 Fe2+离子水解，影响显色。 Bi3+，Cd2+，Hg2+，Ag+，Zn2+等离子与显色剂生成沉淀，Ca2+，Cu2+，Ni2+等离子与显色剂形成有色络合物。因此当这些离子共存时，应注意它们的干扰作用。 三、试剂 100μg/mL的铁标准溶液：准确称取0.864g分析纯的NH4Fe(SO4)2·12H2O ，置于一烧杯中，以30mL 2mol/L HCl 溶液溶解后移入1000 mL 容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。 10 μg/mL的铁标准液：由100μg/mL的铁标准溶液准确移取稀释10倍而成。 盐酸羟胺固体及10%溶液（因其不稳定，需临时用时配），0.1%邻二氮杂菲（新配制），1mol/LNaAc溶液。 四、步骤 1、? 条件实验 （1）吸收曲线的绘制：准确移取10 μg/mL 铁标准溶液 5mL于50mL容量瓶中，加入10%盐酸羟胺1mL，摇匀，稍冷，加入1mol/L NaAc溶液5mL和0.1%邻二氮杂菲3mL，以水稀释至刻度，在分光光度计上，用1cm 比色皿，以水为参比溶液，用不同的波长从570 nm 开始到430nm为止，每隔10nm或20nm 测定一次吸光度。然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线，从吸收曲线上确定该测定的适宜波长。 （2）邻二氮杂菲-亚铁络合物的稳定性：用上面溶液继续进行测定，其方法是在最大吸收波长（510nm）处，每隔一定时间测定其吸光度，例如在加入显色剂后立即测定一次吸光度，经30min，60min，120min后，再各测一次吸光度，然后以时间(t)为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制A-t 曲线。此曲线表示了该络合物的稳定性。 （3）显色剂浓度试验：取 50mL容量瓶（或比色管）7个，编号，用5 mL 移液管准确移取10μg/mL铁标准溶液5mL? ，于容量瓶中，加入1mL10%盐酸羟胺溶液，经2 min 后，再加入5mL1mol/LNaAc溶液，然后分别加入0.1%邻二氮杂菲溶液0.3，0.6，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0mL，用水稀释到刻度，摇匀。在分光光度计上，用适宜的波长（510nm）、1cm比色皿，以水为参比，测定上述各溶液的吸光度。然后以加入的邻二氮杂菲的体积为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制曲线，从中找出显色剂的最适宜的加入量。 （4）溶液酸度对络合物的影响：准确移取100μg/mL 铁标准溶液5 mL于100 mL容量瓶中，加入5mL 2mol/L HCl 溶液和10 mL10%盐酸羟胺溶液，经2 min后加入0.1%邻二氮杂菲溶液30mL。以水稀释至刻度，摇匀，备用。取50ml 容量瓶7支，编号，用移液管分别准确移取上述溶液10mL于各容量瓶中。在滴定管中装0.4mol/L NaOH 溶液，然后依次在容量瓶中加入溶液0.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，以水稀释至刻度，摇匀，使各溶液的pH从≤2开始逐步增加至12以上。测定各容量瓶中溶液的pH，先用pH=1～14广泛pH试纸粗略确定其pH，然后进一步用精密pH试纸确定其较准确的pH。同时在分光光度计上用适宜的波长（510nm），1cm 比色皿和水为空白测定各溶液的吸光度A。最后以pH为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制 A-pH 曲线，从曲线上找出适宜的pH范围。 根据上面的条件实验，拟出邻二氮杂菲分光光度法测定铁的分析步骤并讨论之。 2、铁含量的测定* （1）标准曲线的绘制：取50 mL容量瓶（或比色管）6支，分别移取（务必准确量取，为什么？） 铁标准溶液于5支容量瓶中，另一容量瓶中不加铁标准溶液（配制空白溶液，作参比）。然后各加入1mL10%盐酸羟胺，摇匀，经2min 后，再各加5ml 1m