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第十二章 基因表达调控 第一节 原核生物基因表达调控 1. 大肠杆菌乳糖操纵子 1961年法国分子生物学家Jacob和Monod通过对大肠杆菌乳糖突变体研究，提出了操纵子学说（operon theory)。阐明了基因在乳糖利用中的作用。 1 乳糖操纵子的结构 结构基因 (structure gene): LacZ LacY LacA 操纵基因 (operator，LacO)：被调控蛋白特异性结合的一段非编码的DNA序列。调节基因产物— 阻遏物结合位点，结构基因表达活性的开关 启动基因 (promotor，LacP): 位于操纵基因上游的一段非编码的DNA序列。RNA聚合酶结合位点，保证RNA聚合酶准确的识别和结合，使操纵子保持正常的活动。 调节基因（regulator gene，LacI）：位于操纵基因附近的一个抑制位点，编码阻遏物，对操纵子的开放其抑制作用. 又称阻遏基因（repressor gene） 2 乳糖操纵子的调控机制 2）乳糖操纵的负调控 负调控系统(negative regulation system)：没有调节蛋白存在时基因表达，加入某种调节蛋白后基因活性就关闭的控制系统。 调节基因编码的调控蛋白分为： 阻遏蛋白：与操纵基因结合后能减弱或阻止结 构基因的转录。介导负调控 激活蛋白：与操纵基因结合后能增强或启动结 构基因的转录。介导正调控 培养基中有葡萄糖存在时 细菌体内β-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷透性酶、乙酰基转移酶含量很低 培养基中没有葡萄糖而有乳糖存在时 三种酶含量急剧增加，乳糖用完酶含量很快下降 为什么葡萄糖不能诱导三种酶的产生？ cAMP 环磷酸腺苷 CAP 分解物基因激活蛋白 cAMP + CAP cAMP — CAP 腺苷环化酶 ATP cAMP 4）乳糖操纵子的基因突变 lacI基因的突变 LacI+ → LacI— 其产物结构变化, 不能和操纵基因 结合， lac操纵子活动失控，有无乳糖，均有酶的产生，—组成型突变 LacI+ → LacIs其产物结构变化, 可与操纵基因 结合， 但不能与乳糖结合，操纵子活动被抑制，有无乳糖均不产生酶—超阻遏突变 LacO 基因的突变 LacO → LacOc 结构基因突变，乳糖分解受阻， 调控元件突变，结构基因恒定表达。 Trp操纵子结构特点： 阻遏物基因与结构基因不紧密连锁 操纵基因在启动基因区域内 启动基因、操纵基因不直接和结构基因相邻，而和前导序列相连 有衰减子结构 色氨酸操纵子调控机制 色氨酸操纵子负责色氨酸合成 培养基中有足够色氨酸 操纵子关闭 色氨酸合成停止 缺乏色氨酸 操纵子被打开 色氨酸合成开始 色氨酸在阻遏操纵子的活性中起作用 3 应用 对色氨酸生物合成途径中的关键基因trpR进行改造。 敲除trpR基因解除基因组上色氨酸合成和转运关键酶受到的反馈阻遏调控，获得高产菌株. 第二节 真核基因表达调控 1. DNA水平调控 DNA水平调控是通过改变基因组中有关基因的数量、结构顺序和活性而控制基因的表达 调控机制包括： 基因丢失 基因的扩增 重排 化学修饰 1）基因丢失 ：在个体发育过程中，某些原生动物、线虫、昆虫和甲壳类动物的一些体细胞常常丢失整条或部分染色体，而分化产生生殖细胞的那一部分细胞却保留着完整染色体的现象。 2）基因扩增 ：在真核细胞中，某些特定基因的拷贝数有选择性地大量增加的现象 如蟾蜍卵母细胞基因扩增 癌细胞基因扩增 3） 基因重排：DNA分子中核苷酸序列的重新排列 酵母菌不同类型的转换 2. 基因转录水平的调控 1) 顺式作用元件(cisacting elements) 真核基因的顺式作用元件：是指DNA上对基因表达有调节活性的特定的调控序列，其活性仅影响与其自身处于同一DNA分子上的基因。 真核基因的顺式作用元件按功能分为： 启动子(promoter) 增强子(enhancer)； 静止子(silencer)或称沉默基因 。 反式作用因子的结构特征 1、 DNA识别或结合结构域 2、激活基因转录的功