第五章花药和花粉的培养.ppt

第五章 花药和花粉培养 本章主要内容 第一节 花药和花粉培养技术 花药培养：是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以诱导其花粉粒改变发育进程，形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。 花粉培养：是将花粉从花药中分离出来,接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的过程。 目的：利用花粉染色体数目的单倍性，培育出单倍体植株。 一、花药和花粉的培养方法 （一）花粉发育时期 1.适宜时期：单核期，尤其是单核中、晚期 单核靠边期 2.花粉发育时期的检测 （1）外部形态观察：找出外部形态，如幼穗的大小、花蕾大小等与花粉发育的关系。 （2）压片染色法：常用染色剂为醋酸洋红。将花药置于载玻片上压碎，加醋酸洋红1~2滴染色，再用显微镜检查。 （二）培养过程 1.花药培养过程 （1）材料预处理：低温冷藏是最常用的方法。 （2）表面灭菌 （3）接种 （4）培养 花粉---愈伤组织---苗 花粉---胚状体---苗 （5）植株的诱导 草莓花药愈伤组织,花药植株 2.花粉培养 花粉培养成苗途径与花药培养比较: 相同点： 胚状体成苗途径、愈伤组织再分化成苗途径 不同点： 花粉培养： 需进行花粉的分离 特殊的花粉诱导培养 （1）花粉的分离 ①机械分离法 以烟草为例，操作程序大体如下： 取花蕾 取花药 挤出花粉 过滤 低速离心 花粉重新悬浮 离心收集 培养。 ②漂浮释放法 （2）花粉培养方法 看护培养法 利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。 花粉培养过程 二、培养基 （一）基本培养基 1.MS和H培养基：适合双子叶植物花药培养； 2.B5培养基：适合豆科和十字花科花药培养； 3.N6培养基：适合禾谷类作物的花药培养。 （二）植物生长物质的种类和浓度 细胞分裂素可促进胚状体形成； 生长素可诱导愈伤组织形成。 细胞分裂素与生长素比值高时可诱导愈伤组织分化苗。 （三）蔗糖浓度 较高浓度蔗糖可诱导花粉形成愈伤组织； 较低浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗。 （四）有机附加物 椰子汁、玉米汁、马铃薯汁对提高花粉愈伤组织和胚状体诱导率、促进其生长有良好效果。 三、单倍体植株的染色体加倍 （一）花粉植株的倍性 在某些植物中，花药培养得到的多数植株是单倍体，而在大多数植物中花粉植株染色体数的变化是很大的，或为多倍体或为非整倍体。 （二）单倍体植株染色体加倍的方法 1.自然加倍 通过花粉细胞核有丝分裂或核融合染色体可自然加倍，从而获得一定数量的纯和二倍体，但随机性强，难以掌握和利用。 2.人工加倍 常用的是化学诱变法，常用诱变剂为秋水仙素。 （1）小苗浸泡：将诱导产生的幼小花粉植株从培养基取出，在无菌条件下浸泡在一定浓度的秋水仙素溶液中，一定时间后转移到新鲜培养基上继续培养，在烟草中一般使用0.4%秋水仙素溶液，过滤灭菌进行处理。 （2）茎尖处理 将秋水仙素调和到羊毛脂中，然后将羊毛脂涂在单倍体植株的顶芽或腋芽上，诱导分生组织细胞加倍；也可用秋水仙素水溶液，将蘸满溶液的棉球放在顶芽或腋芽上。这两种办法均需加盖塑料以防蒸发。 （3）培养基处理 将秋水仙素直接加入到培养基中，使培养的单倍体细胞加倍，或者使来自单倍体植株的外植体在培养过程中加倍。 3.从愈伤组织再生 将单倍体植物（孢子体）的茎段、叶柄、根茎切下，置适宜的培养基上使之发生愈伤组织，反复继代后再将愈伤组织转移到分化培养基上，即可获得较多二倍体植株。 第二节 花药和花粉培养的应用 一、单倍体植物在育种中的作用 1.克服后代分离，缩短育种年限 2.提高了目标基因型的选择效率 3.有利于隐性基因控制性状的选择 4.快速获得自交系的超雄株 二、我国单倍体育种的成就 1.水稻 2.小麦 3.玉米 本章小结 （1）花药培养是器官培养，花粉培养属细胞培养，但二者培养目的是一样，都是要诱导花粉细胞发育成单倍体细胞，最后发育成单倍体植株。 （2）花药培养一般选择花粉的单核期进行接种。 （3）花药及花粉培养的过程。 （4）花药及花粉培育的应用。 第5章 花药和花粉培养 第5章 花药和花粉培养 花药的培养技术 1 花粉的培养技术 2 花药和花粉培养的应用 3 第5章 花药和花粉培养 1 掌握花药培养和花粉培养的区别； 2 了解花药最佳接种时期； 3 掌握花药培养的大致过程； 4 掌握花粉发育的四种途径； 5 掌握花粉培养的大致过程。 教学目的与要求 第5章 花药和花粉培养 第5章 花药和花粉培养 第5章 花药和花粉培养 被子植物花粉粒的发育 营养核 生殖核 精子 第5章 花药和花粉培养 四分体: 醋酸洋红染色 单核期 双核期 第5章 花药和花粉培养 第5章 花药和花粉培养 第5章 花药和花粉培养 部分花