正交优化超声波提取小鱼仙草黄酮的工艺研究.docVIP

正交优化超声波法提取小鱼仙草黄酮的工艺研究 摘 要：目的：采用正交试验设计探讨小鱼仙草中黄酮提取的最佳工艺条件。方法：运用超声技术提取小鱼仙草黄酮，用比色法测定黄酮提取率。结果：影响超声提取黄酮的因素：乙醇浓度 超声功率 超声频率 提取时间，最佳工艺条件为：以*%乙醇为提取溶剂，提取时间为**min，超声功率***W，超声频率**KHz。最佳工艺条件下黄酮提取率为***%。结论：优化超声提取法提取小鱼仙草中的黄酮，提取效率高，方法方便可行。 关键词：小鱼仙草，总黄酮，正交实验，超声波。 小鱼仙草为唇形科石荠苧属一年生草本植物Mosla dianthera的全草，别名疏花荠苧、野香薷等。具有祛风发表、利湿止痒之功效，主治感冒发热、扁桃体炎、中暑头疼、溃疡病等【】。有关小鱼仙草挥发油的研究报道较多，其挥发油主要含有香荆芥酚、百里香酚、和丁香烯等成分，具有较好的抑菌作用【】；而对小鱼仙草非挥发部分的研究报道较少。现代研究表明，其非挥发部分最主要含有黄酮、酚酸等成分，具有抗菌、抗氧化、抗变态反应的作用【】。目前关于小鱼仙草总黄酮的提取工艺优化方面的研究少见报道。刘小芬等【】对小鱼仙草总黄酮的提取工艺做了单因素考察，缺乏多因素间的交互作用分析，具有一定的局限性。而严云良等【】运用响应面法分析了溶媒倍数、提取时间、提取次数三因素在总黄酮提取中的优化，没有充分反应超声频率及超声功率对优化的作用。超声技术在有效成分提取方法研究中的广泛运用，已越来越为广大科学研究者所重视，并显示出其明显的优势。本文采用超声波法提取小鱼仙草中黄酮，采用比色法【】对黄酮进行含量测定。以黄酮提取率为考察指标，通过正交试验，对小鱼仙草中黄酮的提取工艺进行优化。 实验材料与方法 1.1 材料与仪器 小鱼仙草 ***售；芦丁对照品 ******；其余试剂 均为国产分析纯。 ****可见分光光度计、****紫外-可见分光光度计 ******公司；****型超声波清洗器 *****公司； 1.2 试验方法 1.2.1 黄酮样品的提取 精密称取小鱼仙草粉末0.5g，根据文献【】，初步选定提取温度、提取时间、超声功率、超声频率为：**、**min、***W、**kHz。进行超声提取，提取液冷却后抽滤，再用漏斗过滤，滤液用蒸馏水定容至**mL容量瓶，即为待测小鱼仙草样品液。 1.2.2 黄酮提取率的测定 1.2.2.1 芦丁标准溶液的配制 精密称取105干燥恒重的芦丁对照品10.6mg，加50%乙醇溶解定容于50mL容量瓶，得浓度为2.12mg/mL标准品溶液。精密吸取标准品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分别置于25mL容量瓶中，加5%1.0mL，摇匀，放置6min后加10%1.0mL，摇匀，放置6min后加10%10mL，加50%乙醇稀释至25mL，摇匀，静置15min。在紫外分光光度计中190～900nm范围内扫描，测出最大吸收波长位于510nm处。分别测量系列标准溶液浓度在最适波长510nm处的吸光度。数据处理的回归方程：，，结果表明芦丁在0.212～1.272mg范围内线性关系良好。 1.2.2.3 样品含量测定 精确吸取样品液1mL，按标准曲线绘制下方法测定其吸光度值，按下式计算黄酮提取率。 黄酮提取率（%）=CDV/W×100% 式中，C为待测液黄酮含量（g/L），D为稀释倍数，V为提取液体积（mL），W为样品干重（g）。 1.2.3 黄酮提取工艺 1.2.3.1 单因素实验 以乙醇作为溶剂作为溶剂，分析黄酮提取效果影响的几个因素：提取温度，提取时间，超声功率，超声频率。依次以其中一个因素为变量，其他各因素条件不变来考察黄酮提取率。 1.2.3.2 正交试验 根据单因素试验结果，选取提取温度、提取时间、超声功率和超声频率的三个水平为主要考察因素，以黄酮提取率作为考察指标，采用正交表进行实验，每组实验重复3次取平均值，因素水平表见表1。 表1 正交实验因素水平表 Table 1 Factors and levels in orthogonal array design 水平 因素 A 超声功率 （W） B 超声频率 （kHz） C 时间 （min） D 温度 （） 1 100 18 80 70 2 150 22 90 80 3 200 25 100 90 2 结果