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病理学技术概论及常规病理技术 南方医科大学病理学系 申 洪 课程简介 内容：着重介绍重要的病理学技术及其应用 目的：提供病理学研究所需的基本技术知识 体系和病理学研究的一些基本思路； 课程结构： 常规病理学技术 细胞病理学技术及其在肿瘤病理学中的应用 电镜技术及其在病理学中的应用 定量病理学技术及其在病理学中的应用 基本要求 基本概念 基本原理 基本方法和技术关键 联系实际，思考应用 一、病理学技术概念范畴 1 病理学 2 病理学技术 广义概念 狭义概念：围绕病理形态学 病理形态学技术类型 ???? 尸体剖验技术 ?????? 常规组织病理学技术 ?????? 常规细胞病理学技术 ?????? 组织化学和细胞化学技术 ?????? 免疫组织化学技术 流式细胞技术 ?????? 超微结构技术 体视学技术： ?????? 定量病理学技术 图像分析技术 分子病理学技术 激光共聚焦显微镜 动物实验技术 三维重建技术 ?????? 细胞培养技术 一、尸体剖验技术 ?目的意义：查出病因和病变，明确诊断及死因 解释临床症状和体征等临床现象 及时发现和确诊新疾病，特别是传染病 提供第一手科研材料 ??法律手续：死者家属签字 临床医生签字 单位签字 ? 基本要求：研究生：参加病理解剖 本科生：见习 二 常规病理学技术 组织取材及固定技术 包埋 石蜡切片技术 冰冻切片技术 HE染色 标本的来源与收集 1、临床活检 2、尸体解剖 3、实验动物 注意事项 1、检查申请单的姓名，标本的件数是否与之相符合。 2、标本是否符合要求。 （一）取材、固定 标本的来源与收集 1、临床活检 2、尸体解剖 3、实验动物 注意事项 1、检查申请单的姓名及标本件数是否相符。 2、标本是否符合要求。 取材： 切取病变组织或拟研究的组织 及时，尽可能新鲜 迅速固定、冷藏 生理盐水、磷酸缓冲液等溶液 刀要快，不要挤压组织 注意研究目的 培养 定量 对比观察 临床诊断 固 定 （一）固定：用化学试剂保持尸体、器官、组 织结构和细胞结构的固有形态结 构的过程谓固定，所用的化学试 剂谓固定剂或固定液。 目的：防止自溶、腐败，保持良好结构 原理：组织及细胞内蛋白凝固，或使有 关成分沉淀、变性，成为不溶性 物质。 方法：浸泡 灌注：局部灌注、全身灌注 蒸汽熏蒸 固定时间: 常规组织病理学: 可长时间固定 细胞病理学：可长时间固定 细胞化学：不宜过长，约1小时为宜 固定后处理： 充分洗涤 固定时间越长，洗涤时间也应相应增加 固定注意事项 1. 固定液有毒性，注意自身防护 2. 及时，尽可能新鲜 3. 超微结构观察：低温固定 4. 注意不同研究目的对固定液的特殊需要 细胞化学 超微结构 细胞涂片巴氏染色 5. 固定液用量：足，必要时及时更换。 6. 固定时间 7. 固定后洗涤 常用固定液 甲醛溶液：4％甲醛，或 10％福尔马林 40％甲醛（福尔马林，Formeldehyde） 用于无特要求的组织常规固定 乙醇（Ethyl Alcohol）: 95% 用