第8章 植物转基因技术课件.pptVIP

第六章 小 结 植物体细胞杂交即原生质体融合，是获得胞质杂种的理想途径 体细胞杂交在远缘育种与新物种、新资源创造中具有深远意义 原生质体融合技术主要有PEG融合和电融合 杂种的成功培养是建立在原生质体的培养技术上的，选择和鉴定是获得细胞杂种的关键 提高融合效率和培养重复性是该技术研究的重点 细胞杂种是体细胞遗传研究的良好体系 思考题1、原生质体定义2、原生质体分离、纯化方法3、原生质体融合方法及原理4、原生质体融合的意义5、植物原生质体培养的方法6、植物体细胞杂交的概念和类型7、体细胞杂种鉴定方法8、体细胞杂种应用 第八章 植物转基因技术 植物基因转化技术 载体介导法, 如农杆菌介导转化法 DNA直接转移法 植物生物反应器 2 DNA直接转移法 8.2 植物生物反应器 植物生物反应器是指通过基因工程途径，以常见的农作物作为“化学工厂”，通过大规模种植生产具有高经济附加值的医用蛋白、工农业用酶、特殊碳水化合物、生物可降解塑料、脂类及其它一些次生代谢产物等生物制剂的方法。 8.2 植物生物反应器 在植物生物反应器研究中，最受人们关注同时研究进展也最快的是生产各种疫苗用的抗原蛋白。 疫苗的形式也由菌体疫苗发展到亚单位疫苗（Subunit??vaccine），甚至还产生了DNA疫苗。 1992年，美国人C.J.Arntzen和H.S.Mason率先提出了用转基因植物生产疫苗的新思路。 此后，国内外多个实验室相继在烟草、马铃薯、番茄、苜蓿和莴苣中表达了乙肝表面抗原、大肠杆菌热敏毒素B亚基、霍乱毒素B亚基、诺瓦克病毒壳蛋白和狂犬病毒G蛋白等抗原，并利用在植物中表达的抗原进行了动物和人体的免疫实验，获得了大量有价值的研究数据，为今后利用转基因植物生产疫苗奠定了良好基础 。 植物来源的重组药用蛋白第一次临床应用研究是由星球生物技术有限公司（Planet??Biotechnology,??Inc）. 美国著名的孟山都公司（Monsanto）已经培育出一种转基因玉米，每公顷玉米可以产生3.7公斤达到药用蛋白标准的人类抗体。 植物来源的抗体在体外的稳定性和体内的生物活性与动物细胞培养来源的抗体是相同的，利用它将开发出一种低成本的治疗方法来防治某些由性传播的疾病。 Large??Scale??Biology公司和斯坦福大学已经合作开发了一种肿瘤特异性疫苗，可用于阻止细胞的恶性生长，它们利用植物病毒作为瞬时表达系统。 治疗的目的是在患者体内产生特殊的抗体，它能特异性识别恶性生长的B细胞表面特异性位点，使靶细胞最终受到破坏，而正常的细胞不会受到任何影响。 ?另外一个引起全球关注的研究成果是，瑞士联邦技术研究所, 在2000年将水仙的八氢番茄红素合成酶和番茄红素环化酶基因导入水稻，研制出一种富含β胡萝卜素（维生素A前体）的水稻，品种名称T309，每克稻米含1.6mg胡萝卜素，由于稻米色泽金黄，故称为“金色大米”。 我国植物生物反应器的研究始于上世纪90年代初期，虽然在构建高效植物表达载体和培育转基因植物等主要技术环节上与国外相差无几，但在研究的广度和深度上与发达国家相比却存在很大差距。 幸运的是，在制订“九五”，“十五”“863”计划时，选择了“利用转基因植物生产口服疫苗和生物可降解塑料”等研究课题予以资助。已取得较多的研究成果。 我国植物生物反应器的研究和利用还主要集中在药用蛋白的研究和应用方面。而利用转基因植物生产特殊饱和或不饱和脂肪酸、改性淀粉、环糊精或糖醇、次生代谢产物、工农业用酶制剂的研究仍然没有引起国家足够的重视，其实，这些生物制剂的市场潜力也是非常可观的。 如利用转基因玉米生产植酸酶，在加工成动物饲料添加剂后，可有效降低家畜排泄物中的磷含量，这对于降低水污染和保护生态环境方面很有意义。 目前，利用重组DNA技术生产的大多数治疗用血液蛋白几乎都是在哺乳动物细胞表达系统中生产出来的。该系统的主要优点是所表达的重组蛋白能够进行正确的折叠及完成其他翻译后加工过程的机会比较高，然而，有许多因素仍然限制哺乳动物细胞表达系统的广泛应用，这些因素包括： 1）即使在最适的培养条件下，重组蛋白在哺乳动物细胞中的表达水平仍很低，通常为每天每升数十毫克； 2）重组蛋白最后必需从培养液中分离提纯出来，这会进一步导致产量损失和增加生产成本； 3）哺乳动物细胞表达系统日常维护费用非常高，这也使产品的生产成本居高不下； 4）哺乳动物细胞对外力比较敏感，而振荡培养通常又是工业化大规模生产所不可缺少的，这就使扩大生产规模变得相当困难； 5）胎牛血清是哺乳动物细胞生长所不可缺少的，它的价格昂贵，而且不同批次之间成份相差很大，这些变化会导致细胞的生长情况不一致，进而影响到细胞发酵过程及下游的提纯加工过程； 6）哺乳动物细胞