5.说明与讨论 食品中维生素D的含量一般很低,而维生素A、维生素E、胆固醇,甾醇等成分的含量往往都大大超过维生素D、严重干扰维生素D的测定,因此测定前必须经过层析除去这些干扰成分。 可参考柱层析图 此法不能区分D2和D3,测定值是两者的总量。 四、维生素E的测定 测定方法 比色法 荧光法 GC法 HPLC法(VA、VE) (一)HPLC法(VE) 1.原理 试样中的维生素E经皂化提取处理后,将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法C18反相柱将维生素E分离,经紫外检测器检测,并用内标法定量测定。 维生素A和维生素E色谱图 (二) 比色法 1.原理 维生素E能将高铁离子还原为低铁离子,低铁离子与α,α’—联氮苯发生颜色反应,可以进行比色测定。500nm 3、测定步骤 (1)样品处理 ①皂化 ②纯化 (2)样品测定 (3)标准曲线的绘制 5.说明与讨论 ①维生素E在碱性条件下与空气接触易被氧化,因此在皂化时,用氮气流保护,也可加入焦性没食子酸作为抗氧化剂,防止维生素E的氧化。 ②此方法的反应没有特异性,当有其他还原性物质存在时,同样能与Fe+3反应生成Fe2+,使测定结果偏高,故处理前应将它们除去。 ⑤由于光能促进维生素E氧化,因此尽可能避光操作 本章重点与难点内容 1 维生素的分类 2 试说明
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