A-MO01环微生物的检测和控制.docVIP

华东理工大学2009-2010学年第I学期 《微生物学综合实验》实验报告 2009.1 班级：生工072姓名：荧方高光 叶闻坚氏春开课学院：生物工程学院任课教师：郑一涛 成绩 论文题目：环境微生物的检测和控制 论文要求： 字数不少于3000字。 教师评语： 评分项目及满分标准 单项满分 得分 1）论文整体格式规范符合要求、图标清晰； 10 2）材料和方法准确、全面 10 3）实验内容全面、准确 30 4）数据分析与讨论翔实正确 30 5）实验技能 20 总分 教师签字： 年 月 日 微生物综合实验A-MO01 环境微生物的检测和控制 实验目的： 了解温度、渗透压对微生物生长的影响，以及高温、化学药剂、紫外线等对微生物的杀灭和抑制作用。 掌握空气中沉降菌及物体表面微生物的检测方法；了解空气的分级标准。 了解减少环境中微生物数量的主要手段。 实验原理： 许多物理和化学因素可以影响微生物的生长，作用原理各不相同。高温能使微生物的蛋白质和核酸等重要生物高分子发生变性、破坏，例如它可使核酸发生脱氨、脱嘌呤或降解，以及破坏细胞膜上的类脂质成分等，严重时可导致微生物的死亡。对一般微生物来讲，它们的细胞若置于高渗溶液中，水将通过细胞膜从低浓度的细胞内部进入细胞周围的溶液中，造成细胞脱水而引起质壁分离，使细胞不能生长甚至死亡。环境中的不适合的pH值对微生物的生命活动影响很大，主要作用在于：引起细胞膜电荷的变化，从而影响了微生物对营养物质的吸收；影响代谢过程中酶的活性；改变生长环境中营养物质的可给性以及有害物质的毒性。紫外光能作用于DNA分子，形成胸腺嘧啶二聚体，从而破坏了其分子结构，抑制了DNA复制，妨碍了蛋白质和酶的合成。微生物在有氧情况下经紫外照射可产生光化学氧化反应，生成的过氧化氢具有强烈氧化作用，使细胞内活性物质失活变性。化学物质对细胞的不良影响主要存在两种机理：1. 蛋白质变性，如酚类、醇类、醛类、碘分子等；2. 破坏细胞膜的透性，使细胞内含物外溢，如酚类、醇类、新洁尔灭等。青霉素能抑制细胞壁的合成从而导致细胞破裂死亡。链霉素作用于核糖体30 S亚基而抑制其活性，从而干扰蛋白质的合成。 各种化学或物理因子只有在达到一定剂量或程度时才能导致微生物的死亡，剂量或程度不够则只能抑制微生物生长。 采用平板暴露法收集空气中的活微生物粒子，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到裸眼可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 （四）不同pH对微生物生长的影响 (1)配制肉汤液体培养基，分别调pH至3、7和11，每种PH各2管，每管盛培养液5mL，灭菌备用。 (2)每管肉汤液体培养基中分别接种大肠杆菌，枯草杆菌摇勺置37℃温箱中培养。 (3)培养12h后观察结果。根据菌液的混浊程度判定微生物在不同pH生长情况。 （五）微生物对高温的抵抗能力 不同的微生物对高温的抵抗力不同，芽孢杆菌的芽孢对高温有较强的抵抗能力。 (2)取4支装有灭过菌的培养液试管，每管装5mL培养液，。 (3)培养液管中各接入大肠杆菌和枯革芽孢杆菌，两支，混匀。 (4)将4支已接种的培养液管同时效入100℃水浴中，10mim后取出2管，再过10mim后，取出2管。各管取出后立即用冷水或冰浴冷却。 (5)将各管置于37℃温箱中培养24h后、观察和记录生长情况，以“－”表示不生长，“＋”表示生长，并以“＋”，“＋＋”，“＋＋＋”表示不同生长量。 （六）化学药剂对微生物的抑制和杀灭作用： 用无菌吸管分别吸取已培养18小时的金黄色葡萄球菌菌液0.5 ml于两个已编号的无菌培养皿中。倒入已熔化并冷却至45℃左右的肉汤琼脂培养基15 ml左右于上述培养皿中，混匀培养基和菌液。待培养基凝固后，用经灼烧并冷却的干净镊子取无菌小圆滤纸片分别蘸取新洁尔灭、福尔马林、碘酒、石炭酸溶液后，放入培养皿中，贴在培养基表面。每种药剂浸2片，每个培育皿试验2种药剂。培养皿倒置于37℃培养48小时后观察，测量抑菌圈的大小。 （七）抗生素对微生物的抑制和杀灭作用： 将熔化的肉汤琼脂培养基铺成平板。用无菌操作分别取3种微生物：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌，在平板上划4条直线，注意各直线保持平行。按同样方法在另外一平板上接种4种微生物。用镊子取