张绍阳 201524 《分子生物学》实验讲稿20130223.docVIP

铜仁学院 Tong ren xue yuan 讲 稿 课 程 分子生物学 实验 专 业 生物科学科 年 级 2010级 教 师 张 绍 阳 职 称、学 位 讲 师 博 士 部系、教研室 生物科学与化学系植物教研室 2012至2013学年度第二学期 实验1 CTAB法提取植物基因组DNA 实验目的和原理 1 基因组DNA提取实验意义 基因组DNA提取是植物生物技术的基本环节，所得DNA可用于基因克隆、分子标记分析、基因文库构建以及Southern杂交等试验操作。 2 基因组DNA提取方法 关于植物基因组DNA提取的方法有诸多文献报道，但基本步骤和原理是相近的，其提取液主要成份不外乎两种试剂，即十六烷基三甲基溴化铵（hexadecyltrimethyl-ammonium bromide，CTAB）和十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate，SDS），并以CTAB为多。本次实验介绍CTAB法提取植物基因组DNA原理和相应方法。 3 基因组DNA提取CTAB法基本原理 植物组织是由多种组分构成的，如糖、脂类、蛋白质、DNA和RNA构成。提取基因组DNA就是要先将组织细胞进行破碎，然后通过试剂作用和离心作用将其余杂质去除。植物组织经液氮粉碎后用含表面活性剂的CTAB提取液提取，经氯仿抽提，DNA和RNA得到回收而蛋白质及细胞碎片和脂溶性杂质得到去除。