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第5章 基因表达调控 Regulation of Gene Expression 第一节基因表达调控的基本概念 第三节  原核基因表达调节 三、色氨酸 tryptophan 操纵子的调控模式 色氨酸的合成分5步完成；P247 每个环节需要一种酶，编码这些酶的基因紧密连锁在一起，被转录在一条多顺反子mRNA上； 分别以trpE/G、trpD、 trpF、 trpC、trpB、trpA代表，编码邻氨基苯甲酸合成酶、邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶、异构酶、吲哚甘油-3-磷酸合成酶、色氨酸合成酶。 负调控的、可阻遏的操纵子：即这操纵子通常是开放转录的，当有效应物 色氨酸为阻遏剂 作用时，则关闭转录。 特点: 1 trpR 和trpABCDE 不连锁 2 操纵基因在启动子内 3 有衰减子 attenuator /弱化子 4 启动子和结构基因不直接相连，二者被 前导序列所隔开 4.3 弱化子与前导肽 现象： 在色氨酸高浓度和低浓度时观察到trp操纵子的表达水平相差约600倍，而阻遏作用仅使转录降低70倍。 阻遏物 阻遏蛋白）失活突变并不能完消除色氨酸对trp操纵子表达的影响。 发现：仔细研究发现这种调控现象与色氨酸操纵子特殊的结构有关。可能存在其它调控机制。 （1）阻遏作用只是一个一级开关，主管转录是否启动。 （2）另一个系统进行细调控并决定已经启动的转录是否继续下去（弱化作用）。 1、弱化子： DNA中可导致转录过早终止的一段核苷酸序列（123-150区），是位于转录起始区的一种内部终止子。如此区段转录的mRNA形成发夹结构，则能阻止RNA聚合酶转录基因。反之则RNA聚合酶能通过，基因表达。 弱化作用：指能控制RNA聚合酶通读弱化子能力的调控机制。 研究弱化子中引起终止的mRNA碱基序列，发现该区mRNA通过自我配对可以形成茎-环结构，有典型的终止子特点。 2、前导序列：在trp mRNA5′端trpE基因的起始密码前一个长162bp的mRNA片段。Trp操纵子的前导肽：由前导序列翻译产生的一个含有14个AA的多肽。其中有两个相邻的色氨酸。P251 细菌通过弱化作用弥补阻遏作用的不足，因为阻遏作用只能使转录不起始，对于已经起始的转录，只能通过弱化作用使之中途停下来。 阻遏作用的信号是细胞内色氨酸的多少；弱化作用的信号则是细胞内载有色氨酸的tRNA的多少。 在细菌细胞内这两种作用相辅相成，体现着生物体内周密的调控作用。 五、转录后水平上的调控 P272 1、翻译起始的调控 RBS（核糖体结合位点）： mRNA链上起始密码子AUG上游的一段非翻译区。在RBS中有SD序列，该序列与核糖体16SrRNA的3’端互补配对，促使核糖体结合到mRNA上，有利于翻译的起始。 RBS与核糖体的结合强度取决于SD序列的结构及其与起始密码AUG之间的距离。SD与AUG之间相距一般以4-10个核苷酸为佳，9个核苷酸最佳。 SD- 4-10（9）-AUG。 2、稀有密码子对翻译的影响 已知dnaG（编码引物酶）和rpoD（编码RNA聚合酶亚基）及rpsU（30S核糖体上的S21蛋白）属于大肠杆菌基因组上的同一个操纵子。 这3个基因产物在细胞中数量上却大不相同：dnaG产物50拷贝，rpoD2800拷贝，rpsU40000拷贝？ 基因转录出来的三个蛋白相应的mRNA拷贝数大体相同，由于翻译的调控使得蛋白的拷贝数发生了很大的变化。 研究dnaG序列发现其中含有不少稀有密码子，也就是说这些密码子在其他基因中利用频率很低，而在dnaG中却很高。见表 细胞内对应于稀有密码子的tRNA较少，高频率使用稀有密码子的基因翻译过程极容易受阻，影响了蛋白质合成的总量。如调节蛋白如LacI、AraC、TrpR等在细胞中的量很少。 大肠杆菌噬菌体ΦX174（最早发现）/丝状RNA噬菌体/线粒体DNA/细菌染色体上都有重叠基因存在。 现象：Trp操纵子由5个基因（trpE、D、C、B、A）组成，在正常情况下，操纵子中5个基因产物是等量的，但trpE突变后，其邻近的trpD产量比下游的trpBA产量要低得多？? 　 研究trpE和trpD以及trpB和trpA两对基因中核苷酸序列与翻译偶联的关系，发现trpE基因的终止密码子和trpD基因的起始密码子共用一个核苷酸。 第四节 真核基因表达调节 图13-6 组蛋白结构及其化学修饰 A. 组蛋白与DNA组成的核小体；B. 组蛋白的氨基端伸出核小体，形成组蛋白尾巴；C. 四种组蛋白组成的八聚体 组蛋白修饰对于基因表达影响的机制也包括两种相互包容的理论。即：组蛋白的修饰直接影响染色质或核小体的结构，以及化学修饰征集了其他调控基因转录的蛋白质，为其他功能分子与组蛋白结合搭建了一个平台。这些理论