实验五抗体效价的Elisa测定.pptVIP

酶标板的清洗：采用ELx50TM型微孔板洗板机，注射泵驱动的液体输送，条状单排清洗或全板清洗 了解转膜电泳原理的应用及操作 Western Blotting or immunoblotting a specific primary antibody 1979, Towbin 1975, Southern, Southern blotting 1977, Alwine, Northern blotting 1979, Towbin, Western Blotting 1982, Reihart, Eastern blotting ,双向蛋白质印记 * * 实验五 酶联免疫吸附测定BSA抗体效价 ? 1.目的要求 1 学习酶联免疫吸附测定的基本原理。 2 掌握酶联免疫吸附测定技术，抗体的效价测定及酶联免疫测定仪的使用。 2.基本原理 免疫酶技术:酶标Ab/Ag,酶结合物的酶在免疫反应后，作用于厎物后显色，根据颜色的有无和深浅，定量测定Ab/Ag。 免疫反应：一次或数次 具Ag,Ab特异的免疫学反应 酶促反应：只进行一次 显示出生物放大作用，灵敏度ng,pg 60年代初期，Averameas Ram等 建立了免疫酶技术 immunoenzymatic techniques 利用特殊的交联剂研制出辣根过氧化物酶---人血清白蛋白及酸性磷酸酯酶---抗体，统称为酶标记物或酶结合物，用于抗原或抗体的示踪、定位或定量测定 酶联免疫吸附测定 enzyme-linked immunosorbent assay简称为Elisa -----是在免疫酶技术 immunoenzymatic techniques 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。本法兼有灵敏度高和特异性强两方面的优点。 1974年 Voller等 用聚苯乙烯微量反应板作为免疫吸附剂吸附抗体 抗原 ，再与相应的酶标记物结合 操作更方便，易重复 灵敏度可高达ng（10-9g）至pg 10-12g ， Enzyme-Linked Immunosorbent Assay 免疫标记技术 应用各种液相和固相免疫分析方法，对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性和定量测定 标记抗体或抗原 荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学 或生物 发光剂 镜检观察或进行自动化测定 荧光显微镜，射线测量仪，酶标检测仪，电子显微镜和发光免疫测定仪等 直接在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上,对抗原抗体反应进行定性和定位研究 酶