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农药生物活性测定 实验指导 游 红 编 实验一 供试目标昆虫的饲养 ——棉铃虫的饲养 实验目的： 明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义； 了解常见目标昆虫的饲养条件及方法； 学习棉铃虫的饲养方法。 实验原理： 杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。 饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。 棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。食性杂，可长年饲养。但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。若连续大量饲养，须用人工饲养。 主要仪器及试材： 试虫：棉铃虫； 饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。 饲料： （1）、饲料组成： 熟大豆粉（g） 20.0 玉米粉（g） 30.0 大麦粉（g） 30.0 抗坏血酸 （g） 1.0 干酵母（g） 8.0 琼脂 （g） 3.5 苯甲酸钠 （g） 0.8 棉油 (ml) 0.5 36％醋酸 (ml) 6.0 10％甲醛 (ml) 1.0 水(ml) 200 (2)、配制方法： 取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度1.0——1.5cm，冷却后备用。 实验方法与步骤： 饲养条件： 养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。 饲养方法： （1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入 皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。 （2）、待幼虫长到2龄后，移入装有人工饲料的培养皿（5cm）内，每皿一头，幼虫在内取食，直至老熟。 （3）、幼虫进入预蛹期，即转移到装有无菌细土的养虫缸内，必须保持湿润，以利入土化蛹和蛹的存活。 （4）、成虫羽化后，雌雄配对，放入养虫缸内，缸内放一个内有10%蜂蜜液的培养皿，皿内放脱脂棉，以便蛾子从润湿的棉上吸取蜂蜜。养虫缸上蒙上纱布，并用橡皮筋扎好。蛾子在缸内交尾产卵，每日将产于纱布上的卵连同纱布取下，并换新纱布和蜂蜜。 实验注意事项： 注意饲养室及饲养用具的清洁、消毒。 注意饲养环境的控制，棉铃虫的幼虫在3龄后具有自相残杀习性，应单独饲养。 在棉铃虫饲养过程中，应注意及时更换新鲜的饲料，以防饲料变干。配制好的饲料必须在低温下储存。 实验结果处理： 每日观察记录棉铃虫的取食、生长情况，并认真填写观察记录。 观察棉铃虫的蜕皮生长情况，记录各龄期的生长时间长短及试虫的平均体重。 思考题： 标准目标昆虫的饲养在生物测定工作中有何意义？ 在棉铃虫的饲养过程中应该注意那些问题？并对其饲养条件和方法提出改进意见。 实验二 杀虫剂初步毒力测定 实验目的： 通过本试验学习掌握杀虫剂室内毒力初筛试验的操作技术。 观察昆虫中毒征象特征——兴奋、击倒、抽搐、麻痹、昏迷、死亡等。 明确标准目标昆虫代表性的实用意义。 实验原理： 为了初步确定某些化学物质是否对某些害虫具有毒杀能力，应首先进行一次淘汰试验，或叫初筛试验，又称初步综合杀虫毒力试验。这种试验不涉及毒杀方式和毒杀能力的大小，因此，不严格限制用药量和均匀度，一般采用较高的浓度，尽量发挥综合毒效（包括胃毒、触杀、薰蒸等作用）。 一般农药初筛毒力测定方法，根据试虫对象不同，多采用浸渍法、喷雾法、喷粉法、饲料混药法等。每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致，设置温度一般在20-28℃，相对湿度60-80%，通气良好。一般液剂在0.1-1%，粉剂1-10%。 主要仪器及试材： 试虫：小菜蛾（3龄）。 供试药剂：药剂A、药剂B。 试验器材：养虫室、potter喷雾塔、量筒、镊子、吸管、烧杯、培养皿、毛笔等。 实验方法与步骤 药剂配制：将A、B药剂配成0.1%的溶液备用。 试虫移取： 取小菜蛾3龄幼虫集中混匀后，用毛笔刷入培养皿，每处理10头，重复一次。 喷布质量检定 用9cm的白色园纸片来检查喷雾雾滴的大小