使用离子色谱法接检测尿素溶液及尿素蛋白缓冲液中的氰酸根.docVIP

使用离子色谱法直接检测尿素溶液及尿素蛋白缓冲液中的氰酸根 摘要：本文提供一种使用离子色谱抑制型电导法直接检测尿素溶液及尿素蛋白缓冲液中氰酸根的方法。采用IonPac AS15 分析柱，使用电解淋洗液发生器在线产生高纯氢氧化钾淋洗液。利用高容量和特殊选择性分析柱，可有效兼容高浓度氯离子和磷酸根基体。我们针对方法检测线性、系统噪音、量化限和检出限进行了整体评估，证明该法稳定可靠，抗干扰能力强。 关键词：离子色谱；尿素；氰酸根； 尿素作为一种化工原料被广泛应用于蛋白质提纯，包括商业用途的重组细胞蛋白分离提 纯、重组蛋白制造业中蛋白质的变性及溶液化。一些蛋白质在中等浓度（4-6M）的尿素中很容易溶液化和变性，而大多数则在较高浓度（8-10M）下溶液化和变性。尿素在水溶液中降解为氰酸盐和铵盐。在接近中性pH，即典型的生物缓冲pH范围时，氰酸盐转化率最高。 氰酸根可通过与自由氨基、羧基、巯基、咪唑、酚、羟基、磷酸盐基团反应使蛋白质氨 基甲酰化。从而改变蛋白质的稳定性、功能、有效性。因此，需要对其含量进行有效控制。 尿素溶液通常需要消电离以去除氰酸盐。但尿素缓冲体系中氰酸根含量依旧较高，一些尿素 缓冲体系显示氰酸盐浓度高达20mM。为在高离子强度基体中测定氰酸盐，建立一种准确、灵敏的方法十分必要。 离子色谱法（IC）检测氰酸盐效果很好，2004年已有使用了戴安公司的