miRNA论文iR-34c在小鼠胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化过程中的作用.docVIP

miRNA论文：miR-34c在小鼠胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化过程中的作用 【中文摘要】胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)作为一种高度未分化细胞,可被诱导分化为包括生殖细胞在内的机体几乎所有的细胞类型。生殖细胞是高等哺乳动物体内非常特殊的一类成体细胞,承担着传宗接代和种族延续的重任。国内外已有多篇有关小鼠胚胎干细胞向雄性生殖细胞成功诱导分化的报道,但诱导效率均很低,关键原因在于对雄性哺乳动物生殖细胞发生的确切机理仍不清楚。多项研究显示,作为一类新发现的小RNA分子,miRNA可能在哺乳动物雄性生殖细胞发生过程中发挥着重要作用。本研究旨在通过定量PCR等手段筛选确定与哺乳动物雄性生殖细胞发生相关的特异miRNA分子,合成相应模拟物以及构建该miRNA的表达载体,转染小鼠胚胎干细胞系(mESCs),并结合RA诱导,观察该miRNA超表达对mESCs向雄性生殖细胞诱导效率的影响;进一步通过生物信息学手段预测该miRNA作用的靶基因,构建含有该基因的双荧光素酶载体,通过载体转染试验对预测结果进行验证,初步揭示该miRNA发挥作用的可能靶基因。1依据文献初步筛选与哺乳动物生殖发生可能相关的4个miRNA分子,分别为mmu-miR-34c、mmu-miR-449a、mmu-let-7e、mml-miR-122a。设计相应茎环引物,定量PCR检测其在小鼠各个不