苯酚—硫酸法测多糖技术方案.pptVIP

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2016-10-12 发布于湖北
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苯酚—硫酸法测多糖技术方案.ppt

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实验步骤苯酚—硫酸法测多糖试剂：（1）90%的苯酚溶液：称取90克苯酚，加蒸馏水10ml，在室温下可保存数月（2）9%苯酚溶液：取3ml 90%苯酚溶液，加蒸馏水30ml，现配现用（3）浓硫酸实验步骤苯酚—硫酸法测多糖 2ml（水、空白培养基、无菌发酵液）+1ml 9% 苯酚+5ml 浓硫酸 =8ml 恒温条件下，30min后测A485nm 实验步骤 Bradford法测蛋白试剂： Bradford储存液 100ml 95%乙醇 200ml 88%磷酸 350mg Serva G蓝室温下长期保持稳定 100μl蛋白质溶液+1ml 工作液 2min测A595 1h内完成 Bradford 工作液 425ml 双蒸水 15ml 95%乙醇 30ml 88%磷酸 30ml Bradford贮存液 Whatman 1号滤纸过滤，保温与室温棕色瓶中，可使用数周，但使用前需要过滤实验步骤培养温度与初始pH对抑菌效果的影响: 1.取OD=0.4的CL菌株1ml分别接入初始pH为4.0、5.5、7.0、8.5的100ml海水牛肉膏蛋白胨培养基中，25℃ 170r/min振荡培养4d 2.取OD=0.4的CL菌株1ml接入100ml海水牛肉膏蛋白胨培养基中，分别在20℃、25℃、30℃、37℃ 170r/min振荡培养4d 3.制备无菌发酵液后利用牛津杯法观察抑菌圈大小实验结果 1.抑菌活性物质是蛋白质还是多糖? Bradford测蛋白苯酚-硫酸法测多糖实验结果 CL菌株在发酵过程中并不产胞外多糖，可以断定抗菌物质不是多糖。但是利用Bradford法测蛋白质，发酵前后蛋白质含量有明显变化，但是并不能断定抗菌物质是蛋白质类，有可能是CL菌株产的胞外蛋白酶类，使蛋白质含量发生变化。为探索其物质可能还需要进一步验证实验结果培养温度与初始pH对抑菌效果的影响由此可以看出，最佳培养条件为：初始pH 5.5 培养温度 25℃ 培养时间 4d