转基因小鼠大脑tau疾病的传播与蔓延.doc

转基因小鼠大脑中tau疾病的传播与蔓延 过度磷酸化的tau蛋白在几种神经退行性疾病的细胞中形成了纤维状的细胞内夹物，包括阿尔茨海默氏症。 在疾病发展过程中，神经元tau蛋白夹杂物首先出现在脑反式嗅皮质并且似乎从那里蔓延到大脑左侧海马回区 当夹杂物发展到海马回时认知功能发生明显缺陷，阿尔茨海默病的病理学上的特点为： 大量的具有tau蛋白夹杂物的新皮层 丰富的细胞外β-淀粉样蛋白沉积。 Pick病，进行性核上性麻痹，皮质基底节变性等疾病的特点是tou蛋白夹杂物丰富，缺乏β-淀粉样蛋白沉积。 Tau突变导致家族性的额颞叶痴呆，肯定该tau蛋白的功能失调足以引起神经退行性疾病和老年痴呆 因此，转基因小鼠对人类神经细胞tau蛋白表达变异（例如，P301S），是一些蛋白病的基本特征，包括神经退行性疾病和由过度磷酸化tau蛋白组成的丰富的纤维状物质。 相反，小鼠型线表明野生型tau蛋白单体异构不会产生纤维状tau蛋白或显示神经退行性疾病。 在这里，我们使用了tau蛋白表达线来研究tau疾病是否可以传播。 我们证实，将tau蛋白P301S突变表达小鼠的脑抽提物注入到野生型tau蛋白表达的动物脑中可诱导人类tau蛋白组装成丝状并将这种病理现象从注射区扩散到邻近的大脑区域。 转基因鼠系ALZ17和P301S的Tau蛋白被用来做实验。ALZ17家系的小鼠，能表达人脑中最长的tau蛋白异构体（长达441个氨基酸）但不使tau蛋白聚合成纤维状（补充资料，图S1a）。 相比之下， 在P301S鼠系中，p301S基因能表达383个氨基酸的人类tau蛋白异构体，p301s突变导致遗传性额颞叶痴呆，生成大量的tau蛋白纤维状夹杂物（补充资料，图S1a） 图1 ALZ17小鼠对注射的tau蛋白的病理学感应，注射物为人P301S tau蛋白的转基因小鼠大脑抽提物。 （a）将18个月大的 ALZ17系小鼠的海马回CA3区用抗tau蛋白的抗体AT8染色，或Gallyas-Braak银染或抗tau抗体AT100染色。 非注射（左），注射非转基因小鼠的大脑抽提物18个月后的对照组（中）注射六个月大的人P301S tau蛋白的转基因小鼠大脑抽提物15个月后的实验组（右）。 各部分用苏木精染色不褪色。，比例尺，50微米（所有小组倍率相同）。 （b）免疫电镜观察ALZ17小鼠大脑中的抽提纤维，在注射了人P301S tau蛋白的转基因小鼠大脑抽提物15个月后。用抗tau蛋白血清134，189和304，及抗体AT100标记。比例尺，100纳米 c）在没有纤维状tau蛋白病症的ALZ17小鼠体内注射tau蛋白免疫耗竭的人tau蛋白P301S大脑提取物。左上面板显示抗tau蛋白的抗体HT7的免疫印迹，HT7是（线1）后和（线2）免疫衰竭前从P301S系小鼠大脑中提取的。 右上方和下方的板显示的是ALZ17系小鼠用tau蛋白免疫耗竭的P301S系小鼠大脑提取物注射6个月后用Gallyas-Braak染色的齿状回，海马伞和脑下脚。 各部分都有复杂的苏木，比例尺，50微米（所有小组倍率相同）。完整扫描免疫印迹数据在的补充资料中，图。S7。 383个氨基酸和441氨基酸的tau蛋白异构体都包含4个聚合的微管重复，但它们在氨基末端两个可选的29个氨基酸的插入不同。 为了研究tau蛋白聚合是否可以传播，我们提取6月大的人类tau蛋白P301S小鼠脑组织进行匀浆并注射的到三个月大的ALZ17系小鼠的海马回和覆大脑皮层。 注射前，将匀进行浆免疫印迹和免疫电镜分析。人类tau蛋白可由免疫印迹法检测为55,000-64,000蛋白带（55 - 64K）（补充资料，图。S1b）。 最慢的迁移tau蛋白的种类是免疫反应性的抗体AT100（补充资料，图。S1b）和其他磷酸化依赖抗tau蛋白抗体。（未显示数据） 免疫电镜显示，组织提取物中观察到tau蛋白纤维（补充资料，图。S1c）。 注射人类tau蛋白P301S小鼠脑提取物能诱导ALZ17小鼠tau蛋白聚合的病理现象，如由Gallyas- Braak银染染色现象（图1a）和由免疫电镜观察到tau蛋白纤维丝的存在（图1b）所示。 将注射脑提取物液6个月，12个月和15个月后（每组五个平行）细胞内观察Gallyas-Braak染色现象。 除了银染阳性神经细胞体和程序，注射 tau蛋白P301S系小鼠脑提取物会导致抗体AT100免疫反应的出现（图1a），这种反应是受tau蛋白指示。 相比之下，没有银染阳性病变的则观测到的相应水平的十八个月大的未注射ALZ17系小鼠的海马回（补充资料，图18。S2A）或注射非转基因对照组小鼠大脑提取物15个月后的ALZ17系小鼠得海马回（图1a）。 图2在注射部位ALZ17小鼠的Gallyas-Braak染色阳性结构数目