CHEM006Zeocin抗菌素.doc

Zeocin抗菌素CHEM006 规格 100mg/ml 背景简介： Zeocin 属于博莱霉素家族一员，是从Streptomyces CL990中提取的一种铜螯合糖肽抗生素混合物Zeocin与DNA结合，可使嘌呤和嘧啶基发生链性断裂或丢失，抑制DNA合成其次，它可以抑制RNA和蛋白合成，还可使细胞停留在细胞周期的G 2相。ZC55H85O21N20S2Cu - HCl 分子量：1525 使用说明： 一般说来，浓度为0.5至1000 μg/ml 的Zeocin足以杀死绝大多数的好氧性细胞。但是，细胞的敏感性依赖于pH的变化，如培养基的pH越高，细胞越敏感。因此，在实际使用时应根据培养基的pH的高低来调整Zeocin的用量（当pH较高时，可适当减少其用量）。另外，在高渗的培养基中Zeocin的活性会有所下降（如原生质体的重建），此时应增加Zeocin的用量。 细菌筛选： Zeocin基因（以viagene载体为例）由人工合成的大肠杆菌启动子EM7表达，转化普通的大肠杆菌感受态细胞（如HB101、DH5α,、MC1061）后均可带有Zeocin抗性基因。请不要使用带有Tn5换位因子的大肠杆菌感受态细胞（如MC1066），Tn5因子会编码一个博莱霉素抗性基因从而影响Zeocin的作用。 细菌筛选时所用的低盐LB固体培养基：酵母粉5g/l, 胰蛋白胨10g/l, NaCl 5g/l, 琼脂15 g/l, pH 7.0，加入Zeocin抗菌素（100mg/ml，1：4000稀释）即成为筛选用培养基-1000 μg/ml。在刚开始的实验里，建议您使用我们推荐的最佳浓度（见下表）。与G418相比，Zeocin将细胞杀死并将其从培养皿中分离出来需要更多的时间（特别当细胞浓度较高时）。经过5－20Zeocin抗性基因的转染子可以形成。 转染后48小时更换新鲜的含Zeocin的培养基。 每3－4转染后7天观察细胞的生长情况挑取5－10个阳性克隆继续培养7天，进行细胞毒理性分析。25%）。 Zeocin在各种不同细胞系筛选时的工作浓度： Cell line Specie Tissue Culture medium Zeocin（μg/ml） Ref. / Source 293 Human Kidney DMEM 100 in-house testing HeLa Human Uterus DMEM 100 in-house testing MCF-7 Human Breast adenocarcinoma DMEM 100 in-house testing WiDr Human Colorectal adenocarcinoma DMEM 50-100 in-house testing B16 Mouse Melanoma RPMI 20-50 4-7 C2C12 Mouse Myoblast DMEM 250-500 in-house testing CHO Hamster Ovary DMEM 100-250 4-5 PC1.0 Hamster Pancreatic adenocarcinoma RPMI 200-400 in-house testing C6 Rat Glioma DMEM 100-200 in-house testing COS Monkey Kidney DMEM 250 5 注意事项： Zeocin为蓝色透明液体（100 mg/ml），室温运输，收到后请于-20°C保存，可保存1年。含有Zeocin的琼脂糖平板于4°C可保存1个月。 Zeocin在过高或过低pH及弱氧化剂的条件下不稳定，且变性不可逆。 宁波保税区西区创业大道7号2C-1,315800, 电话:+86-574-座机电话号码 传真:+86-574-座机电话号码 , webmaster@