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《》教学大纲课程名称：英文名称：engineering 课程类型: 专业必修 学　　时：学　　分： 先修课程： 生物化学、分子生物学 一、课程目的和任务二、基本要求、内容 （综合性实验，2学时） 1．实验类别：专业 2．实验目的：以CDNA为模板克隆获得鸡PD-1目的片段，学会PCR技术及反应体系和条件，学会使用微量紫外核酸分析仪器。 3．实验主要内容： （1）PCR反应 （2）检测PCR产物的浓度及纯度。 4．实验类型：综合 5．实验要求：必修 6．主要仪器：微量移液枪、PCR仪、微量紫外核酸分析仪等。 实验二 琼脂糖凝胶检测PD-1 PCR产物（综合性实验，2学时） 1．实验类别：专业 2．实验目的：利用琼脂糖凝胶电泳技术检测获得PD-1产物的分子量。 3．实验主要内容： （1）琼脂糖凝胶电泳的制备 （2）电泳检测PCR产物的分子量大小及浓度。 4．实验类型：综合 5．实验要求：必修 6．主要仪器：微量移液枪、电泳仪、凝胶成像系统、制胶模具等。 实验三 PD-1 PCR产物的胶回收纯化（综合性实验，2学时） 1．实验类别：专业 2．实验目的：利用琼脂糖凝胶电泳技术和胶回收技术纯化获得纯化PD-1产物 3．实验主要内容： （1）琼脂糖凝胶电泳的制备 （2）电泳并切胶回收PD-1 PCR产物 （3）利用胶回收试剂盒回收纯化PD-1目的片段 4．实验类型：综合 5．实验要求：必修 6．主要仪器：微量移液枪、电泳仪、制胶模具、离心机水浴锅等。 实验四 PD-1 PCR产物的胶回收纯化（综合性实验，2学时） 1．实验类别：专业 2．实验目的：利用琼脂糖凝胶电泳技术和胶回收技术纯化获得纯化PD-1产物 3．实验主要内容： （1）琼脂糖凝胶电泳的制备 （2）电泳并切胶回收PD-1 PCR产物 （3）利用胶回收试剂盒回收纯化PD-1目的片段 4．实验类型：综合 5．实验要求：必修 6．主要仪器：微量移液枪、电泳仪、制胶模具、离心机水浴锅、凝胶成像等。 实验五 PD-1胶回收产物与T载体的连接及DH5a转化（综合性实验，2学时） 1．实验类别：专业 2．实验目的：利用T载体与连接酶构建PD-1-T克隆载体 3．实验主要内容： （1）PD-1与T载体连接体系构建及连接反应 （2）重组载体PD-1-T的DH5a转化 4．实验类型：综合 5．实验要求：必修 6．主要仪器：微量移液枪、水浴锅、培养箱、微型离心机、无菌操作台、凝胶成像系统等。 实验六 PD-1-T与PET28表达载体的双酶切鉴定、回收（综合性实验，2学时） 1．实验类别：专业 2．实验目的：利用限制性内切酶获得目的片段及Pet28表达载体双酶切片段 3．实验主要内容： （1）PD-1-T及Pet28质粒的提取 （2）PD-1-T及Pet28表达载体的双酶切 （3）PD-1-T及Pet28表达载体的双酶切产物的胶回收 4．实验类型：综合 5．实验要求：必修 6．主要仪器：微量移液枪、水浴锅、离心机、凝胶成像系统等。 实验七 PD-1的PET28表达载体的构建（综合性实验，2学时） 1．实验类别：专业 2．实验目的：连接酶将PD-1双酶切产物与Pet28表达载体双酶切产物连接构建原核表达载体。 3．实验主要内容： （1）PD-1双酶切产物及Pet28表达载体的双酶切产物的连接 4．实验类型：综合 5．实验要求：必修 6．主要仪器：微量移液枪、水浴锅、离心机等。 实验八 Pet28-PD-1转化表达菌种构建原核表达系统（综合性实验，2学时） 1．实验类别：专业 2．实验目的：将Pet28-PD-1阳性重组子转化至Rosetta表达菌种中原核表达 3．实验主要内容： （1）Pet28-PD-1质粒的提取及鉴定 （2）Pet28-PD-1阳性重组子的Rosetta转化 4．实验类型：综合 5．实验要求：必修 6．主要仪器：微量移液枪、水浴锅、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、无菌操作台等。 实验九 实验技能测试（综合性实验，2学时） 1．实验类别：专业 2．实验目的：考察学生对本学期实验操作及内容的理解和应用能力 3．实验主要内容： （1）无菌操作 （2）微量加样 （3）琼脂糖凝胶制备 （4）PCR反应体系及仪器操作 （5）连接体系及连接条件 （6）双酶切体系及反应条件 （7）转化方法及操作 （8）凝胶成像系统的使用 （9）质粒提取技术及电泳技术 4．实验类型：综合 5．实验要求：必修 6．主要仪器：微量移液枪、PCR仪、水浴锅、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、无菌操作台等。 四、考方式 、推荐教材和教学参考书（黑体，小4号字） 《》，编著，出版社。《》，，出版社。 （黑体，小4号字）