RAPD与AFLP分子标记的原理与应用.docVIP

分子標記在番石榴基因型遺傳相似性分析與性狀鑑定上的應用 Application of molecular markers in genotype similarity analysis and characteristics identification of guava Psidium guajava L. 研究生：陳袖真 Hsiu-Chen Chen 指導教授：陳幼光 Yu-Kuang Chen 【摘要】 番石榴 Psidium guajava L. 為桃金孃科 Myrtaceae 番石榴屬 Psidium 之熱帶及亞熱帶果樹，為台灣重要經濟果樹之一。番石榴的品種種類繁多，外表性狀極為相似，品種間不易區別，常造成育種上的困擾。分子標記的發展及在植物遺傳育種上的廣泛應用，亦為植物的品系鑑定提供一有效工具。本實驗係利用逢機擴增多型性DNA random amplified polymorphic DNA，RAPD 、簡單序列重複間序列 inter-simple sequence repeats，ISSR 及擴增片段長度多型性 amplified fragment length polymorphism，AFLP 三種以PCR polymerase chain reaction 為基礎的DNA指紋技術作為番石榴品系鑑定的依據。分析84個RAPD引子，從中篩選出37個具多型性的引子 佔44 % ，平均每引子可產生6.68個多型性條帶；分析100個ISSR引子，發現46個引子可擴增出條帶，然只有11個引子能產生較多的多型性條帶 佔23.9% ，平均每引子可產生6個多型性條帶；而以AFLP而言，於11組引子對中有3組的引子可產生較多的多型性條帶 佔27.7 % ，平均每引子可產生10個多型性條帶。以NT-SYS軟體依據Nei與Li之UPGMA unweighted pair-group method with arithmetic mean 法分析番石榴品系間的遺傳相似性，RAPD、ISSR與AFLP估算所測試番石榴品系間的遺傳相似性分別介於0.30-0.99、0.39-0.99與0.53-0.99之間；於親緣關係圖中顯示此三種分子標記皆能區分不同的番石榴並將其分群出來，如草莓番石榴；而對於果實有或無籽、果皮與葉片呈紅或綠色及果實是否具更年性等性狀，則以RAPD與AFLP較能將其作明顯的分群。在利用標記進行番石榴性狀的鑑定上，已找到可以區別番石榴紅色與綠色葉片顏色與更年性與非更年性果實兩種特性之RAPD標記。此外，‘水晶拔’被認為是‘泰國拔’芽條變異而來，從本試驗發現兩者的遺傳相似性在0.95以上，且亦找到可區別‘水晶拔’與‘泰國拔’的條帶，其是否與‘水晶拔’無籽化相關，此極値得進一步探討。 關鍵字：分子標記、逢機擴增多型性DNA、簡單序列重複間序列、擴增片段長度多型性 【Abstract】 Guava Psidum guajava L. belongs to the family Myrtaceae and is distributed throughout the tropics. It is one of the economically important fruits in Taiwan. Due to the similarity in their appearance, different cultivars cannot be easily distinguished from each other, which causes confusion in breeding. Molecular markers have been developed and applied broadly in plant genetics and breeding. This technology provides an effective tool in cultivar identification. In this study, three PCR polymerase chain reaction -based DNA fingerprinting techniques, including RAPD random amplified polymorphic DNA , ISSR inter-simple sequence repeats , and AFLP amplified fragment length polymorphism were used to determine genetic similarity among 63 guava genotyp