Tris缓冲液（TBS和THB）的配制.docVIP

Tris缓冲液（TBS和THB）的配制 （一）TBS的配制 0.05 M TBS pH7.4 的配制： Tris ?三羟甲基胺基甲烷 12.1g NaCl 17.5g 加蒸馏水 1500ml 磁性搅拌下滴加浓HCl至pH为7.4，再加蒸馏水至2000ml，即可。 如需含1%?Triton X-100，则在滴加HCl前先加入20ml Triton X-100。 （二）THB的配制 A液 0.2 M Tris ： MW 121.14 称取2.428克 Tris，溶于100毫升蒸馏水中。 B液 0.1 N HCl ： 取37% HCl 比重1:19 0.84毫升，加入蒸馏水中，使成100毫升。 不同pH 7.19 ~ 9.10 的0.05 M THB配制：按下表，取A液25ml加B液Xml，补加蒸馏水至100ml。 B X pH B X pH? 45.0 7.19 25.0 8.14 42.5 7.36 22.5 8.23 41.4 7.40 20.0 8.32 40.0 7.54 17.5 8.41 38.4 7.60 15.0 8.51 37.5 7.66 12.5 8.62 35.0 7.77 10.0 8.74 32.5 7.87 7.5 8.92 30.0 7.96 5.0 9.10 27.5 8.05 免疫组织化学中，常用pH7.6的THB。 磷酸盐缓冲液（PB）的配制 （1）A液（0.2M磷酸二氢钠水溶液）： NaH2PO4·H2O 27.6g，溶于蒸馏水中，稀释至1000ml。 （2）B液（0.2M磷酸氢二钠水溶液）： Na2HPO4·7H2O 53.6g 或Na2HPO4·12 H2O? 71.6g或Na2HPO4·2 H2O 35.6g 加蒸馏水溶解，加水至1000ml。 （3）不同pH值磷酸盐缓冲液（PB）缓冲液的配制 A液X ml 参照下表 中，加入B液Y ml，为0.2M PB。若再加蒸馏水至200ml则成0.1M PB。 PH X ml Y ml pH X ml Y ml 5.7 93.5 6.5 6.9 45.0 55.0 5.8 92.0 8.0 7.0 39.0 61.0 5.9 90.0 10.0 7.1 33.0 67.0 6.0 87.7 12.3 7.2 28.0 72.0 6.1 85.0 15.0 7.3 23.0 77.0 6.2 81.5 18.5 7.4 19.0 81.0 6.3 77.5 22.5 7.5 16.0 84.0 6.4 73.5 26.5 7.6 13.0 87.0 6.5 68.5 31.5 7.7 10.0 90.0 6.6 62.5 37.5 7.8 8.5 91.5 6.7 56.5 43.5 7.9 7.0 93.0 6.8 51.0 49.0 8.0 5.3 94.7 若先分别配成0.1M，1/15M 和1/200 M的A液和B液，可按下表配成相应浓度所需pH值的PB KH2PO4或NaH2 PO4H2O ml Na2HPO4 ml pH M/10 pH M/15 pH M/200 46 4 5.67 5.74 5.94 45 5 5.78 5.83 6.06 44 6 5.86 5.91 6.14 43 7 5.94 5.99 6.22 42 8 6.02 6.07 6.30 41 9 6.08 6.14 6.36 40 10 6.12 6.19 6.42 39 11 6.17 6.24 6.47 38 12 6.23 6.28 6.57 37 13 6.28 6.32 6.61 36 14 6.33 6.37 6.65 35 15 6.39 6.41 6.68 34 16 6.41 6.45 6.72 33 17 6.45 6.49 6.75 32 18 6.49 6.53 6.79 31 19 6.53 6.56 6.82 30 20 6.55 6.59 6.88 29 21 6.58 6.63 6.91 28 22 6.61 6.68 6.95 27 23 6.65 6.72 7.00 26 24 6.70 6.76 7.05 25 25 6.76 6.81 7.09 24 26 6.81 6.86 7.13 23 27 6.84 6.91 7.16 22 28 6.89 6.94 7.18 21 29 6.89 6.96 7.20 20 30 6.91 6.98 7.22 19 31 6.94 7.01 7.25 18 32 6.97 7.03 7.26