酸性磷酸酯酶基础实验.docVIP

实验 酶促反应与时间的关系——初速度时间范围测定 [原理] 酸性磷酸酯酶（Acid phosphatase E.C.3.1.3.2），植物的种子、霉菌、肝脏和人体的前列腺中。它酸性磷酸酯酶是酶动力学研究的好材料。它能专一性水解磷酸单酯键。本实验选用绿豆芽作材料，从中提取酸性磷酸酯酶。 利用产物的这种特性，可以定量地测定产物的生成量，从而求得酶的活力单位。即测定单位时间内405nm处光吸收值的变化，来确定酸性磷酸酯酶的活性。 酸性磷酸酯酶一个活力单位是指在酶反应的最适条件下，每分钟生成1μmol产物所需的酶量。 要进行酶活力测定，首先要确定酶反应时间，酶的反应时间应该在初速度时间范围内选择。可以通过进程曲线的制作而求出酶的初速度时间范围。本实验进程曲线是在酶反应的最适条件下采用每隔一定时间测产物生成量的方法，以酶反应时间为横坐标，产物生成量为纵坐标绘制而成。从进程曲线可知，在曲线起始一段时间内为直线，其斜率代表初速度。随反应时间延长，曲线趋于平坦，斜率变小，反应速度下降。要真实反映出酶活力大小，就应在初速度时间内测定。求出酶反应初速度的时间范围是酶动力学性质的一系列研究中的组成部分和必要前提。 [试剂和器材] 1、试剂： （1）酸性磷酸酯酶原酶液 取萌发好的绿豆芽，剪去根的头部，称取豆芽茎20g，用蒸馏水洗干净，用研钵研碎，加0.2mol/L乙酸盐缓冲液4m