鲍曼不动杆菌脉冲场凝胶电泳实验步骤.docVIP

鲍曼不动杆菌脉冲场凝胶电泳标准操作程序 生物安全警告：所操作菌为致病菌，请按二级生物安全水平操作，转移和操作活菌时更要注意。处理大量菌株，请在生物安全柜中进行。以正确方式对接触培养物的塑料制品和玻璃制品进行消毒或丢弃。开始操作之前，请阅读所有指导。把所有接触过细胞悬液或凝胶块的塑料制品、玻璃制品、吸管、小铲等当作污染材料，按照实验室的要求丢弃或消毒。可重复使用的制胶模具须在清洗前消毒；可丢弃的制胶模具及胶带和用来把凝胶块从样品孔中推出的小片，应该用10%漂白剂消毒30分钟以上清洗和重复使用。 提前准备从检测培养基上挑取单菌落，种于平板（或相当的培养基）上培养；用同一个接种针/环穿刺或种小螺帽管中培养基，以保证必要时重复检测同一个克隆。37℃培养14-18小时。 第一天 54℃）、水浴箱（56℃）。 用TE缓冲液（具体试剂配制方法见附件）制备1%Seakem Gold：1%SDS，56℃（55-60℃均可）水浴箱内至少15分钟，再加入预热到56℃的10%SDS溶液2.5ml，置于56℃水浴箱备用。 在Falcon 2054管（或其他相当的管）上标记样品名称和空白对照在1.5ml管上标记好对应样品的名称 在Falcon 2054管中分别加入约2ml细胞悬浊液CSB用CSB湿润，从培养皿上刮取适量细菌，均匀悬浊于CSB中通过加入CSB稀释或增加菌量提高浓度，调整细胞悬液浓度至指定范围