兰花组织培养资料.pptVIP

三、兰花工业 兰科（Orchidaceae）是单子叶植物中最大的一个科，约有450个属20000余种，在世界各地均有分布，特别是热带、亚热带的一些国家和地区。兰花花色鲜艳，形态各异，珍奇名贵，品位幽雅，价格昂贵，备受人们的喜爱。传统的兰花栽培方法主要靠分株繁殖，繁殖速度慢。 贮藏和运输困难，易带病毒，严重阻碍了在世界范围内的流通。用兰花的种子也可以进行繁殖，但发芽率及低，仅5%左右，很难满足生产需要。组织培养用于兰花的快繁已取得了快速进展。从20世界60年代开始用茎尖培养方法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织培养快速繁殖的关键技术，并很快发展成为从20世界60年代开始用茎尖培养方法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织培养快速繁殖的关键技术，并很快发展成为现代化兰花工业。目前已有进70个属数百种兰花可用组织培养方法进行繁殖，兰花生产工厂也分布在世界各地。 兰花组培的外植体 种子 茎尖 茎段 叶片 根 兰花组培的途径 原球茎途径 兰花的组织培养过程 初代培养 无菌处理 继代培养（增殖培养） 壮苗培养 生根培养 炼苗（移栽驯化） 组培中可能出现的问题 污染 变异 玻璃化 褐化 黄化 铁皮石斛的组织培养 铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐－5℃的低温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。 铁皮石斛的组织培养技术路线 初代培养基的设计 继代培养基的设计 生根培养基的设计 外植体的选择 外植体的处理 接种实验 一、接种准备工作 1、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风 2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养物作为材料） 3、工具消毒 二、接种操作 1、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段2cm 2、接种环烧红，沾一下培养基 3、镊取茎段插于培养基中 4、封口、标记 各时期的培养条件 2）将震荡器或是试管中的花梗取出，置入无菌水中，摇晃瓶身，可重覆此一动作2～3次，但需取出花梗，置入?有无菌水的新瓶中，藉此洗净漂白水，洗净后，以镊子取出花梗，以酒精浓度75%的酒精棉花擦拭花梗，以梗芽生长点向下，酒精棉花擦拭由上而下单一方向擦拭，切勿以来回的方式擦拭梗芽生长点。 （3）将花梗两端切除?芽尖端切90度另一端则呈45度斜切 将切面为45度端插入培养基中 塞子消毒后塞住瓶口 瓶口处再以酒精灯消毒，覆盖上铝箔纸避免感染 成功长出新株体 消毒不彻底瓶内发霉 外植体 丛生芽 培养基 生根发育 完整植株 蔗糖：30g 琼脂：6.8g 诱导培养基 MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.2~5.6】 MS母液： I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5ml。 激素母液：BA10ml,NAA5ml 蔗糖：30g 琼脂：6.8g 土豆汁150ml 增殖培养基 MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%~20% 【pH值5.2~5.6】 取MS母液： IV50ml,5ml,5ml,5ml,5ml; 激素母液：BA5ml,NAA2ml NAA BA IAA 增殖培养将建立的无菌系中的小苗转入增殖培养基中进行增殖培养。增殖培养基以MS为基本培养基，添加不同浓度的生长调节剂BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物。 土豆汁 香蕉汁 IBA 蔗糖：30g 琼脂：6.8g 香蕉汁：200ml 活性炭：20g 生根培养基 1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.2~5.6】 取MS母液： IV25ml,5ml,5ml,5ml,5ml; 激素母液：NAA2~5ml Your Text here 生根培养将丛生芽无菌操作切下单株放在生根培养基中于适宜条件下培养，约1~2周后即生根，以长成完整植株。 优选1年生铁皮石斛植株上生长健壮的茎段 接种小芽苗多易于在苗基部形成丛生芽。 苗的高度为1～2cm时,丛生芽增殖倍数最高数。 生长发育健壮苗优先 1 2 3 Text 1 Text 2 Text 3 摘去叶片和膜质叶鞘，剪成约2cm长带节的小段。 用洗洁剂清洗后置流水下冲20~30 min。 在超净工作台上用75%的酒精消30s0.1%HgCl2灭菌5min后，用无菌水冲洗5~6次，放入垫有干无菌滤纸的培养皿中，以吸去多余水分，茎段两端各切0.2~0.3cm。 * 观赏植物 组织培养之兰花 一、兰花组织培养常用于： 1、无性系快速繁殖； 2、茎尖培