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ICS11.100. C 63 SZDB/Z 深圳市标准化指导性技术文件 SZDB/Z ××- 基于第二代测序技术的HLA高分辨分型 检测标准 2013 -×× -××发布 2013-×× -××实施 深圳市市场监督管理局发布  目 次 前言 II 1 范围 1 2 术语和定义 1 3 缩略语 2 4 检测工作程序 2 4.1 检测对象 2 4.2 受检者资料和样本的采集 2 4.3 实验室工作程序 3 4.4 检测报告 4 4.5 受检者资料和样本的保存 4 4.6 质量控制 5 附录A（资料性附录）基于第二代测序技术的HLA高分辨分型检测送检单 6 附录B（资料性附录）基于第二代测序技术的HLA高分辨分型检测报告单 8 参考文献 9 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由深圳市卫生和人口计划生育委员会归口。 本标准负责起草单位：深圳华大基因健康科技有限公司、深圳华大临床检验中心。 本标准主要起草人：周梅珍、曾昊、颜妙丽。 本标准为首次发布。基于第二代测序技术的HLA高分辨分型检测标准 范围 本标准规定了基于第二代测序技术的HLA高分辨分型的检测对象、受检者资料和样本的采集、实验室工作程序、检测报告、受检者资料和样本的保存、质量控制的要求。 本标准适用于利用第二代测序技术进行HLA高分辨分型检测的机构，对外周血、脐血、口腔拭子或全基因组DNA进行基于第二代测序技术的HLA高分辨分型检测。 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 HLA基因 人类白细胞抗原基因，其编码基因位于人类16号染色体短臂，长约3600KB，根据功能和产物结构的不同，分成3组：经典HLA基因、免疫功能相关基因和免疫无关基因。其中经典HLA基因与输血和移植急性排斥反应密切关联。因此，对于经典的HLA基因进行分型在临床上有重要意义。 HLA高分辨分型 即从基因序列水平对HLA进行分型的技术，其结果精确到血清学水平后的亚型。HLA高分辨分型技术与过去的低分辨相比配型速度更快，配型更精确，使得移植排斥反应更小，手术成功率和术后存活率更高。 第二代测序技术 基于第一代sanger测序技术、利用边合成边测序原理，通过捕捉新合成的末端的标记来确定DNA的序列的一种新的测序技术。第二代测序技术具有通量高、成本低等特点，能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定的测序技术。 碱基对 是形成核酸DNA、RNA单体以及编码遗传信息的化学结构。组成碱基对的碱基包括A、T、G、C、U。 覆盖深度值 用来衡量来源于特定染色体的DNA量的值。如16号染色体上的覆盖深度值为样本定位到16号染色体的DNA分子数目与人类基因组上的16号染色体上的有效片段数的比值。 缩略语 下列缩略语适合于本标准。 HLA：人类白细胞抗原（Human Leukocyte Antigen） bp：碱基对（base pair） DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic Acid） PCR：聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction） Q-PCR：定量聚合酶链反应（Quantitative Polymerase Chain Reaction） SSP：特异性序列引物（Specific Squence Primer） SBT：基于基因测序的分型法（Sequencing Based Typing） NGS：下一代测序技术，即第二代基因测序技术（Next Generation Squecing） SNP：单核甘酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms） 检测工作程序 检测对象 临床具有造血干细胞移植、器官移植HLA配型需求的供患者，骨髓库、脐血库等有造血干细胞HLA配型数据入库需求的机构的样本。 受检者资料和样本的采集 4.2.1资料收集 受检者基本资料：包括受检者个人信息、送检单位信息和受检者当前临床诊断结果。 供患关系：亲缘或非亲缘供患关系。 检测项目：根据临床需要选择需检测位点。 受检者既往病史：包括免疫治疗史和输血史。 4.2.2样本采集、运输与保存 外周血样本 抽血前，除必须服用的药物外不得服用其他药物，以避免或减轻对实验的干扰。 严格按照无菌操作常规，用静脉穿刺术抽取患者外周血4mL（2mL/管×2管）于EDTA或枸橼酸钠抗凝管中。 注：若受检者为血液病患者，且白细胞计数500/mcl，至少采集外周血8mL，无凝血、溶血及污染现象；外周血采集须在输血至少10天后方可进行。 样本保存管应完好，无裂管、开盖等泄漏或样本外溢情况。在采血管上粘贴唯一编