猪瘟净化检测方案 .doc

猪瘟净化检测计划书 ＿ ＿检测室检测计划 编号： 被检测单位 被检测动物 种猪 被检动物总量 动物年龄 种母猪及种公猪 免疫状况 猪瘟免疫过 被检动物基本情况说明 种猪移场， 检测数量 检测比例 检测项目： 猪瘟抗原 检测目的 依据猪瘟抗原检测情况，进行必要的防疫，对于三次免疫未产生抗体，并持续检测出抗原的种猪予以淘汰，保证猪场猪瘟净化。 检测方法 胶体金检测 检测样品来源 种猪场现场采样 样品保存条件 血液离心后，恒温4℃保存，检测前升至室温 仪器及设备 离心机1台 材料及工具 一次性5ml注射器、一次性2ml自带盖离心塑料管。无菌注射用水（5ml×10支）5盒，猪瘟抗体胶体金和猪瘟抗原胶体金各足量（按常规准备猪瘟抗原胶体金预计检测净化数量的1.25倍准备，猪瘟抗体检测胶体金按净化数量的5%准备） 检测实施措施 检测条件：检测室温度20-30℃之间，相对湿度45-60%。 操作方法：见附件一。 预计检测日期 2011年12月 日 结果分析判定 依据检测结果提出相应措施，分析方法见附件二 报告日期 2011年12月 日 检测室审批 检测负责人（签字）： 年 月 日 主管部门审批 主管部门（盖章）： 年 月 日 主管经理审批 主管经理（签字）： 年 月 日 备注 制表人: 审核： 附件一： 猪瘟净化的操作流程 一、基本原理 猪瘟是一种高度接触性传染病，表现急性、亚急性、慢性、不典型或不显症状的病程，十分复杂，传染性强，发病率和死亡率都很高。 猪瘟净化是对猪场内经过免疫猪群的免疫效果、有无野毒存在的有效评估，对于带有野毒并对免疫钝感的种猪进行淘汰，能有效保证猪场免受猪瘟疫病的干扰，提高猪场的猪只存活率和出栏率，提高种母猪的育成率，对于规模性养猪场具有十分重要的意义。 胶体金检测法是一种常用的免疫标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原、抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在兽医临床使用的免疫印迹技术几乎都使用了胶体金标记。具有快速、操作简单的特点。 二、血清提取 对预留母猪进行抽取耳静脉血1.5ml，装入2ml的离心管内，凝固后离心，析出的液体即为被检血清。 另外，也可以使用一次性注射器采血，装血于小试管内，使之凝固成一斜面，放于室温条件下，待血清析出后，倒出即可检测。 集中检测时，可以把血清放于4℃冰箱中密闭保存。 三、检测 1、猪瘟野毒预筛 预检血清回温至室温。 猪瘟抗原胶体金检测卡如果在4℃冰箱中保存的，也要回温至室温。 使用一次性滴头取0.5ml预检血清，向检测卡的检测孔内滴入3滴血清，检测孔侧应向下倾斜0.5cm，使血清充分与纤维膜内的单克隆抗体充分作用，沿胶体金自然扩散到T、C检测线，5-10min，判定，出现T线反应的为阳性。阳性反应的猪再进行猪瘟抗体检测（有条件可以进行兔体交互免疫试验和荧光抗体试验，由于成本较高，操作繁琐，生产场一般不选择此检测方法）。 2、猪瘟抗体检测 使用一次性滴头取0.5ml预检血清，向检测卡的检测孔内滴入3滴血清，检测孔侧应向下倾斜0.5cm，使血清充分与纤维膜内的单克隆抗体充分作用，沿胶体金自然扩散到T、C检测线，5-10min，依据T检测线与标准检测卡对比，判定抗体的滴度。 四、诊断试纸结果判定可能遇到的若干问题 1、若猪发病处于潜伏期时，血液中的病毒量可能较少，相应采样的病毒数量较少。在反应开始的3-5min时T线可能呈现较淡，到10min，反应结束后，线条会呈现的相对清晰； 2、“回线”现象：若反应结束一小时后，T线处再有线出现，这是胶体金倒流现象造成，硝酸纤维膜具有双向的毛细渗透作用，若滴加检测样品量过多，膜在湿润的状况下，可能出现渗透现象，而试纸C\T线处有肉眼见不到的痕迹，若胶体金沉落，便会呈现红色线条，该结果无效； 3、“检测中T线消失”现象：主要是样品中病毒浓度过高，当病毒浓度过高，在T处先形成的夹心免疫抗原抗体复合物被游离的病毒竞争性结合，失去相应的结合位点，从而出现红色线条逐渐变浅，甚至消失； 4、“检测中C线消失”现象：可能患猪经过单克隆抗体的治疗，而目前单克隆抗体基本以鼠源为载体，而胶体金C线处包被的二抗也为鼠源二抗，或者，猪食入了被鼠污染的食物或老鼠也会造成患猪体内产生免疫抗体，从而出现C线消失的现象； 5