液相色谱实验报英科新创.doc

液相色谱分析混合样品中的一、实验目的 1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；2、了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术。 二、实验原理 高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。 三、主要仪器和试剂 主要仪器：岛津液相色谱仪(LC-10AT)[配有紫外检测器，Phenomenex ODS 柱]；μL微量注射器 试剂：苯标准溶液：.0μL/mL ； 甲苯标准溶液：.0μL/mL； 苯、甲苯混合标准溶液：0.0μL/mL ； 甲醇：80%苯和甲苯混合待测溶液四、实验步骤μL的微量注射器分别量取10μL、20μL、 50μL 、100μL的苯和甲苯的混合标准溶液（10.0μL/mL），再分别加入90μL、80μL、50μL 、0μL甲醇将其稀释，作为待测液，其浓度分别为1μL/mL 、2μL/mL 、5μL/mL 、10μL/mL 2、按操作规程开机，并调好色谱条件，使仪器处于工作状态。控制流动相流速为甲醇：0.8mL/min、水：0.2 mL/min；柱温30；检测波长254nm；控制流动相流速为甲醇：0.mL/min、水：0. mL/min；柱温30；检测波长254nm；、苯、甲苯定性分析 在最佳条件下，待基线走稳后，用μL微量注射器分别进样μL苯和甲苯混合待测溶液，μL苯标准溶液（.0μL/mL）和μL甲苯标准溶液（.0μL/mL）(微量注射器用甲醇润洗3～5遍)，观察并记录色谱图上显示的保留时间，确定苯和甲苯的峰。 、苯、甲苯定量分析最佳条件下，待基线走稳后，用μL微量注射器分别进样.0μL/mL 、2.0μL/mL、4.0μL/mL、10.0μL/mL的苯和甲苯混合标准溶液μL。观察并记录各色谱图上的保留时间和峰面积。绘制苯和甲苯混合标准溶液峰面积与相应浓度的标准曲线。 、苯和甲苯混合待测溶液分析 最佳条件下，待基线走稳后，用μL微量注射器进样苯和甲苯混合μL，观察并记录各色谱图上的保留时间和峰面积。 二、定性分析 样品 苯 甲苯 保留时间 3.765 4.917 定量分析 苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml, 5 ul/ml, 10 ul/ml。 苯 甲苯 浓度 峰面积 浓度 峰面积 1 ul/ml 212685 1 ul/ml 387710 2 ul/ml 429291 2 ul/ml 747983 5 ul/ml 954537 5 ul/ml 1533892 10 ul/ml 1905343 10 ul/ml 2928373 Y = aX + b a = 186510.8 b = 36165.15 R^2 = 0.9995768 R = 0.9997884 Y = aX + b a = 278490.9 b = 146280.5 R^2 = 0.9991048 R = 0.9995523 未知样品浓度 未知样品 苯 甲苯 浓度2 2.7ul/ml 3.6ul/ml 浓度1 2.9 ul/ml 3.6ul/ml 实验讨论实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质，组分比较简单只要在实验过程中，严格控制且定量进样，就能采用操作、计算简便的标准曲线法得出准确的实验结果若采用归一化法或内标法，虽然能得到准确更高的实验结果，但由于实验操作计算复杂，，故实验中采用标准曲线法作为定量的方法。 We hereby apply for! Applicant: date date case, agree to write off loans. Loan review signature: date recorded form 17: credit cancellation application form name of borrower ID number and credit limit expiration date year month day to yea