《免疫学基础及验技术》-修.docVIP

《免疫学基础及实验技术》 实验报告 姓名: 姚丽君 专业：针灸推拿学 年级：2002年研究生 实验室：免疫试验室 时间：2003年1月12日 教师：李永念老师 免疫学教研室 人血清I的提取及鉴定 主要原理： 离子交换层析提取人血清I gG：离子交换剂采用DEAE-纤维素，是表面交联有二乙基乙胺基团的纤维素，本身带有真电荷，能吸附阴离子。DEAE-纤维素悬浮在PH高于6.5，克分子浓度低的缓冲液内，置备成层析柱。人血清经过PH7.4磷酸缓冲液透析平衡后，其中的IgG不带电荷或仅带少量电荷，其他的蛋白质则主要带负电荷，这样的血清样品通过相同缓冲液平衡好的DEAE-纤维素柱，除IgG以外的血清蛋白都吸附在柱上，仅IgG最易形成吸附-解离-再吸附-再解离的状态，因此能随洗脱液一起最早从柱中流出，收集洗脱液获得IgG。 血清I鉴定：以收集的洗脱液为抗原，与兔抗人IgG做琼脂双扩散实验，可根据沉淀线的形成确定IgG抗原性。用免疫电泳法使血清中各种蛋白的分子大小以及电荷状态、电荷量均有差异，因而它们的泳动速率也不相同，根据在凹槽中加入免抗人血清，上下两孔加入用蔗糖包埋法进行浓缩后的浓缩液和正常人血清，经一段时间后出现沉淀弧，根据沉淀弧的情况来检测所获的IgG的纯度。用754型分光光度计于280nm紫外光源测定洗脱液光密度值，根据IgG的E1cm1%=14