6_细菌内毒素检查法讲稿.ppt

* * * * * * * * 凝胶法干扰试验 导致干扰的因素： pH值 抗凝因子 螯合剂 葡聚糖 ……. * 凝胶法干扰试验 排除干扰的方法： 稀释 中和 过滤 加热 …… * 凝胶法干扰试验 为确保所选择的处理方法能有效的排除干扰且不会使内毒素失去活性，要使用预先添加了标准内毒素再经过处理的供试品溶液进行干扰试验。 即，先在供试品溶液中添加2λ浓度的标准内毒素，然后用所选择的方法处理溶液，而后再进行稀释、检测。 * 凝胶法干扰试验 由于干扰实验检验的是在供试品存在的情况下内毒素与鲎试剂的反应是否正常，与所使用鲎试剂的灵敏度无关，因此在干扰实验中原则上可使用任一灵敏度的鲎试剂。 建议使用较低灵敏度（如0.5或0.25EU/ml）的鲎试剂，可尽量避免供试品所含的内毒素对干扰实验造成的阳性影响。 * 凝胶法干扰试验 当进行新药的内毒素检查试验前，或无内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时，须进行干扰试验。 须：三个批号以上的供试品，两个以上鲎试剂厂家的试剂。 当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须重新进行干扰试验。 如：内毒素检查时，供试品阳性对照为阴性时 * 凝胶法 ----检查法凝胶限量试验 检验供试品中的内毒素含量是否小于限值的定性方法。 每批供试品必须做 2支供试品管 2支供试品阳性对照 同时 每次实验须做2支阳性对照和2支阴性对照。 * 凝胶法 ----检查法凝胶限量试验 例：替硝唑注射液 ，计算限值为0.5 EU/ml，使用灵敏度为0.125 EU/ml的鲎试剂进行检验，计算 MVD=1.0ml/ml?0.5 EU/ml÷ 0.125 EU/ml=4倍 供试品溶液 供试品阳性对照 阴性对照 阳性对照 供试品溶液： 4倍替硝唑稀释液 供试品阳性对照为：含0.25EU/ml标准内毒素的4倍替硝唑稀释液 阳性对照为：浓度为0.25EU/ml的标准内毒素溶液 * 凝胶法 ----检查法凝胶限量试验 例：替硝唑注射液 ，计算限值为0.5 EU/ml，使用灵敏度为0.125 EU/ml的鲎试剂进行检验，计算 MVD=1.0ml/ml?0.5 EU/ml÷ 0.125 EU/ml=4倍 供试品溶液 供试品阳性对照 阴性对照 阳性对照 + + - - + + 试验有效 * 凝胶法 ----检查法凝胶限量试验 例：替硝唑注射液 ，计算限值为0.5 EU/ml，使用灵敏度为0.125 EU/ml的鲎试剂进行检验，计算 MVD=1.0ml/ml?0.5 EU/ml÷ 0.125 EU/ml=4倍 供试品溶液 供试品阳性对照 阴性对照 阳性对照 + + - - + + - - 此批替硝唑注射液的内毒素含量小于0.5 EU/ml， 符合规定。 * 凝胶法 ----检查法凝胶限量试验 例：替硝唑注射液 ，计算限值为0.5 EU/ml，使用灵敏度为0.125 EU/ml的鲎试剂进行检验，计算 MVD=1.0ml/ml?0.5 EU/ml÷ 0.125 EU/ml=4倍 供试品溶液 供试品阳性对照 阴性对照 阳性对照 此批替硝唑注射液的内毒素含量不小于0.5 EU/ml， 不符合规定。 + + + + + + - - * 凝胶法 ----检查法凝胶限量试验 例：替硝唑注射液 ，计算限值为0.5 EU/ml，使用灵敏度为0.125 EU/ml的鲎试剂进行检验，计算 MVD=1.0ml/ml?0.5 EU/ml÷ 0.125 EU/ml=4倍 供试品溶液 供试品阳性对照 阴性对照 阳性对照 须复试。 - - - + + + + + * 凝胶法 ----检查法凝胶限量试验 复试时，供试品溶液需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判供试品符合规定；否则判供试品不符合规定。 供试品溶液 供试品阳性对照 阴性对照 阳性对照 - - + + + + * 凝胶法 ----检查法凝胶半定量试验 半定量试验是使用凝胶法估测供试品中内毒素含量的方法。 系通过确定反应终点浓度来量化供试品中内毒素的含量。 * 凝胶法 ----检查法凝胶半定量试验 原理：通过供试品系列稀释液与鲎试剂反应，其反应终点浓度的稀释倍数与鲎试剂灵敏度的乘积即为供试品的内毒素含量 。 操作：用检查用水将供试品溶液从已确定的不干扰浓度或稀释倍数下开始进行对倍稀释，制备成2、4、8倍的稀释液，但最大稀释倍数不得超过所使用鲎试